C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/30 (2006.01) B81B 7/00 (2006.01) C07K 1/14 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2740106
A method for extracting proteins from heterogeneous fluids by precipitation using microfluidics. The method uses a digital microfluidic device having an array of discrete actuating electrodes formed on a substrate surface, a hydrophobic working surface coating the substrate surface and array of discrete actuating electrodes, an actuating electrode controller for exciting or de-exciting discrete actuating electrodes for translating liquid droplets over the hydrophobic working surface. Droplets containing protein are dispensed onto positions on the hydrophobic working surface, and droplets containing a protein precipitant are deposited as well. All the drops are translated to one or more corresponding designated protein extraction positions on the hydrophobic working surface where they mix. The mixed drops are incubated at the extraction positions to precipitate the protein contained in the droplets to separate the precipitated protein from a drop of supernatant above the precipitate. Supernatant drops are removed and the precipitants are washed and then precipitants are dried. The method uses an automated protocol for precipitation of proteins onto surfaces, rinsing the precipitates to remove impurities, and resolubilization in buffer for further analysis. The method is compatible with proteins representing a range of different physicochemical properties, as well as with complex mixtures such as fetal bovine serum and cell lysate.
Le procédé ci-décrit permet d'extraire des protéines à partir de fluides hétérogènes par précipitation en recourant à la technologie de la microfluidique. Le procédé utilise un dispositif microfluidique numérique comportant un réseau d'électrodes d'actionnement individuelles formées sur une surface de substrat, une surface de travail hydrophobe revêtant la surface du substrat et du réseau d'électrodes d'actionnement individuelles, et un contrôleur d'électrodes d'actionnement pour exciter ou désexciter les électrodes d'actionnement individuelles et déplacer les gouttelettes liquides sur la surface de travail hydrophobe. Les gouttelettes contenant la protéine sont distribuées sur des positions sur la surface de travail hydrophobe, et des gouttelettes contenant un précipitant pour protéines sont également déposées. Toutes les gouttelettes sont déplacées jusqu'à une ou plusieurs positions d'extraction de protéine désignées correspondantes sur la surface de travail hydrophobe où elles se mélangent. Les gouttelettes mélangées sont incubées aux positions d'extraction pour précipiter la protéine contenue dans les gouttelettes et séparer la protéine précipitée d'une gouttelette de surnageant au-dessus du précipité. Les gouttelettes de surnageant sont éliminées et les précipitants sont lavés, puis séchés. Le procédé utilise un protocole automatisé pour la précipitation des protéines sur des surfaces, le rinçage des précipités pour éliminer les impuretés, et la resolubilisation dans un tampon à des fins d'analyses ultérieures. Le procédé est compatible avec des protéines représentant toute une variété de propriétés physico-chimiques différentes, ainsi qu'avec des mélanges complexes tels que le sérum ftal de buf et les lysats cellulaires.
Jebrail Mais J.
Wheeler Aaron R.
Hill & Schumacher
The Governing Council Of The University Of Toronto
LandOfFree
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