A transmembrane trap for isolating membrane bound proteins

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/10 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01)

Patent

CA 2382101

The present invention relates to methods of identifying the transmembrane domain of membrane-spanning proteins. The membrane-spanning proteins can be Group I receptors, Group II receptors and receptors with multiple transmembrane domains. The methods relate to the use of a death domain-lacking protein, modified to replace its transmembrane domain with a candidate nucleic acid sequence. The absence of apoptosis of a host cell expressing the modified death domain-lacking protein and a death domain-containing protein following exposure to an apoptosis-inducing ligand denotes the presence of a candidate nucleic acid sequence encoding a transmembrane domain of a membrane-spanning receptor. Vectors and host cells producing the modified death domain-lacking protein are also provided. The invention further relates to the identification of the membrane-spanning proteins containing the transmembrane domains identified by the methods of the invention and target molecules for the membrane-spanning proteins. The invention also includes methods of identifying substances which alter the interaction of the membrane-spanning proteins and target molecules identified by methods of the invention.

La présente invention concerne des méthodes d'identification du domaine transmembranaire des protéines transmembranaires. Ces protéines peuvent appartenir aux récepteurs de groupe I, de groupe II et aux récepteurs possédant plusieurs domaines transmembranaires. Ces méthodes ont trait à l'utilisation d'une protéine exempte de domaine de mort cellulaire, modifiée pour remplacer son domaine transmembranaire avec une séquence d'acides nucléiques candidate. L'absence d'apoptose d'une cellule hôte exprimant la protéine modifiée exempte de domaine de mort cellulaire et d'une protéine contenant ledit domaine, suite à une exposition à un ligand inducteur d'apoptose dénote la présence d'une séquence d'acides nucléiques candidate codant un domaine transmembranaire d'un récepteur transmembranaire. Cette invention concerne également des vecteurs et des cellules hôtes qui produisent la protéine modifiée exempte de domaine de mort cellulaire. Elle concerne aussi l'identification des protéines transmembranaires renfermant les domaines transmembranaires identifiés par ces méthodes et des molécules cibles de protéines transmembraires. Ladite invention comprend des méthodes d'identification de substances qui modifient l'interaction des protéines transmembranaires et des molécules cibles identifiées par lesdites méthodes.

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