C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/873 (2010.01) A01K 67/027 (2006.01) C07K 14/62 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/17 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01)
Patent
CA 2690565
The invention relates to a non-human transgenic mammal that is useful for the production of a protein of interest that may be toxic to the mammal. The mammal is characterized by the fact that it is transgenic for the production in its milk of an inactive form of the protein of interest, preferably recombinant human insulin. It is not possible to produce recombinant human insulin in transgenic mammals since this molecule has a certain degree of biological activity in the mammals and could be toxic to the mammal. Thus, the invention involves cloning a genetic construct comprising a sequence encoding a modified human insulin precursor under the control of a beta casein promoter in an expression vector. It also involves transfecting the expression plasmid into fetal bovine somatic cells, such as fibroblasts, and enucleating bovine oocytes by nuclear transfer to generate transgenic embryos. The invention gives rise to transgenic bovine that will be able to produce a modified human insulin precursor in their mammary glands. Afterwards, the milk of these transgenic mammals can be collected, the modified human insulin precursor can be converted in vitro into recombinant human insulin, and the recombinant human insulin can be purified to homogeneity as a pure biopharmaceutical product.
L'invention porte sur un mammifère transgénique non humain qui est utile pour la production d'une protéine d'intérêt qui peut être toxique pour le mammifère. Le mammifère est caractérisé par le fait qu'il est transgénique pour la production dans son lait d'une forme inactive de la protéine d'intérêt, de préférence de l'insuline humaine recombinante. Il n'est pas possible de produire de l'insuline humaine recombinante chez des mammifères transgéniques, étant donné que cette molécule a un certain degré d'activité biologique chez les mammifères et pourrait être toxique pour le mammifère. Ainsi, l'invention met en jeu le clonage d'un produit de construction génétique comprenant une séquence codant pour un précurseur d'insuline humaine modifiée sous le contrôle d'un promoteur de caséine bêta dans un vecteur d'expression. Elle met également en jeu une transfection du plasmide d'expression dans des cellules somatiques bovines ftales, telles que les fibroblastes, et l'énucléation d'oocytes bovins par transfert nucléaire pour générer des embryons transgéniques. L'invention donne naissance à un bovin transgénique qui sera apte à produire un précurseur d'insuline humaine modifiée dans ses glandes mammaires. Après cela, le lait de ces mammifères transgéniques pourra être recueilli, le précurseur d'insuline humaine modifiée pourra être converti in vitro en insuline humaine recombinante, et l'insuline humaine recombinante pourra être purifiée à homogénéité sous la forme d'un produit biopharmaceutique pur.
Bercovich Andres
Criscuolo Marcelo
Fernandez Nahuel
Judewicz Norberto
Melo Carlos
Mbm Intellectual Property Law Llp
Sterrenbeld Biotechnologie North America Inc.
LandOfFree
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