C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12N 15/80 (2006.01)
Patent
CA 2374347
The present invention relates to a method for screening nucleotide sequences encoding anti microbial peptides comprising the steps of: a) ligating a plasmid with the pool of nucleotide sequences operably linked to an inducible promoter, so as to express a peptide which is an enzyme or a mature peptide of less than 100 amino acid residues, optionally linked to a signal peptide, b) transforming host cells which are sensitive to the peptide with the ligated plasmids, c) screening the transformed host cells so as to select viable cells, d) cultivating the viable cells in the presence of inducer so as to induce expressions of said nucleotide sequence, e) selecting cells according to the effect of the inducer on cell growth, and recovering the nucleotide sequence encoding the peptide from the selected cells. DNA shuffling is emphasized as a method for producing the pool of nucleotides.
Cette invention concerne un procédé de criblage de séquences nucléotidiques codant pour des peptides anti-microbiens. Ce procédé consiste à: (a): ligaturer un plasmide avec un ensemble de séquences nucléotidiques reliées fonctionnellement à un promoteur inductible de manière à exprimer un peptide qui est un enzyme ou un peptide mature de moins de 100 résidus d'acides aminés, éventuellement relié à une séquence signal, (b) transformer des cellules hôtes sensibles au peptide avec plasmides ligaturés, (c) soumettre les cellules hôtes à un criblage dans le but de sélectionner des cellules viables, (d) cultiver les cellules viables en présence d'un inducteur pour induire l'expression de ladite séquence nucléotidique,(e) sélectionner des cellules en fonction de l'effet de l'inducteur sur la croissance cellulaire; et récupérer la séquence nucléotidique codant pour le peptide des cellules sélectionnées. L'accent est mis sur le remaniement d'ADN comme méthode de production de l'ensemble de nucléotide.
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
Novozymes A/s
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1456746