C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2260362
Gene mutations or polymorphisms are surely detected, identified or determined by simple procedures within a short period of time directly from specimens containing the gene mutations or polymorphisms in a trace amount within specific regions in target nucleic acids. A method for examining nucleic acids which comprises amplifying a specific region of a target nucleic acid in a specimen to thereby prepare a double stranded sample DNA, adding an excessive amount of the above-mentioned sample DNA to a labeled standard DNA consisting of a double stranded nucleic acid which has a site capable of binding to a solid phase carrier in one strand and a detectable label on another strand to effect competitive hybridization, detecting the above-mentioned labeled standard DNA thus reconstituted with the use of the detectable label and the site capable of binding to a solid phase carrier, and thus determining the degree of the substitution of the complementary strands between the above- mentioned sample DNA and the above-mentioned labeled standard DNA to thereby detect the target DNA which is identical with the above-mentioned labeled standard DNA contained in the above-mentioned sample DNA, characterized in that the detection limit of the target DNA which is identical with the above- mentioned labeled standard DNA contained in the above-mentioned sample DNA is preliminarily specified and, in the step of the competitive hybridization, the extent of the excessiveness of the above-mentioned sample DNA to be added to the above-mentioned labeled standard DNA is specified depending on the detection limit thus specified; and examination kits for detecting, identifying and determining nucleic acids carrying gene mutations or polymorphisms in accordance with this examination method.
Grâce à cette invention des mutations ou des polymorphismes géniques sont détectés, identifiés ou déterminés en toute sécurité par des procédures simples en un temps court, directement à partir de spécimens contenant ces mutations ou polymorphisme génétique, dans une quantité trace, à l'intérieur de régions spécifiques d'acides nucléiques cibles. Un procédé pour examiner les acides nucléiques consiste à amplifier une région spécifique d'un acide nucléique cible dans un spécimen, afin de préparer un ADN échantillon à deux brins, à ajouter une quantité excédentaire de cet ADN échantillon à un ADN standard marqué, constitué d'un acide nucléique à deux brins possédant un site capable de se fixer à un support en phase solide dans l'un des brins et une marque détectable sur l'autre brin, pour créer une hybridation compétitive, à détecter l'ADN standard marqué mentionné ci-dessus, ainsi reconstitué à l'aide de la marque détectable et du site capable de se fixer à un support en phase solide, et, partant, à déterminer le dégré de substitution des brins complémentaires entre cet ADN échantillon et cet ADN standard marqué, afin de détecter l'ADN cible qui est identique à cet ADN standard marqué contenu dans cet ADN échantillon. Ce procédé se caractérise en ce que la limite de détection de l'ADN cible qui est identique à l'ADN standard marqué contenu dans l'ADN échantillon est spécifiée au préalable et en ce que, dans l'étape d'hybridation compétitive, la quantité d'excédent de l'ADN échantillon devant être ajouté à l'ADN standard marqué est spécifiée en fonction de la limite de détection ainsi spécifiée. Cette invention se rapporte en outre à des kits d'examen pour détecter, identifier et déterminer des acides nucléiques portant des mutations ou des polymorphismes géniques en fonction du procédé d'examen ainsi décrit.
Smart & Biggar
Srl Inc.
Wakunaga Pharmaceutical Co. Ltd.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1460264