C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01)
Patent
CA 2194458
A method is provided for determining the presence and/or amount of a microorganism and/or its intracellular material present in a sample characterised in that:(a) exposing the sample to a specific binding agent that has been immobilised upon a solid substrate, the specific binding agent being capable of binding to the microorganism or its intracellular material such that it becomes associated with the solid substrate, (b) exposing the solid substrate to an agent capable of making adenylate kinase associated with the microorganism and/or its intracellular material accessible to solutions applied to the substrate, (c) applying a solution containing adenosine diphosphate (ADP) to the substrate under conditions whereby adenosine triphosphate (ATP) may be produced by any adenylate kinase present, and (d) measuring the amount of adenosine triphosphate (ATP) and relating that to the presence and/or amount of microorganism or intracellular contents. Step (d) may be carried out using an assay that includes a colour forming reaction, but is preferably carried out by use of luciferase/luciferin reagent to produce light proportional to the amount of ATP produced, and that is detected using a luminometer. Preferably step (c) includes presence of magnesium ions at a molar concentration sufficient to allow maximal conversion of ADP to ATP. Most preferably step (b) and (c) are carried out by adding extractant, ADP and magnesium ions to the sample and incubating the mixture for a predetermined period to effect conversion of ADP to ATP.
On décrit un procédé destiné à déterminer dans un échantillon la présence et/ou le niveau d'un micro-organisme et/ou la substance intracellulaire présente dans celui-ci, ledit procédé consistant: (a) à exposer l'échantillon à un agent de liaison spécifique qui a été immobilisé sur un substrat solide, cet agent de liaison étant susceptible de se lier au micro-organisme ou à la substance intracellulaire de celui-ci et s'associe au substrat solide; (b) à exposer le substrat solide à un agent susceptible d'induire l'association de l'adénylate-kinase au micro-organisme et/ou à la substance cellulaire de celui-ci accessible aux solutions appliquées sur le substrat; (c) à appliquer une solution contenant de l'adénosine-diphosphate (ADP) sur le substrat dans des conditions dans lesquelles l'adénosine-triphosphate (ATP) peut être produite par une quelconque adénylate-kinase présente, et (d) à mesurer le niveau d'adénosine-triphosphate (ATP) et à établir un rapport entre ce niveau et la présence et/ou les niveaux du micro-organisme ou de la teneur intracellulaire de celui-ci. On peut effectuer l'étape (d) en utilisant un dosage comprenant une réaction de formation de couleur, mais on préfère effectuer celle-ci en utilisant un réactif de type luciférase/luciférine afin de produire une lumière proportionnelle au niveau d'ATP produite, cette lumière étant détectée à l'aide d'un luminomètre. De préférence, l'étape (c) comprend la présence d'ions magnésium à une concentration molaire suffisante pour permettre une conversion maximale d'ADP en ATP. Les étapes (b) et (c) sont préférablement réalisées par l'addition dans l'échantillon d'un solvant d'extraction, de l'ADP ainsi que des ions magnésium et par mise en incubation du mélange pendant une période de temps prédéterminée pour induire la conversion d'ADP en ATP.
Fetherstonhaugh & Co.
The Secretary Of State For Defence In Her Britannic Majesty's Go
LandOfFree
Method for detecting microorganism does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Method for detecting microorganism, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Method for detecting microorganism will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1472491