Hematological assay and reagent

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/86 (2006.01) C12Q 1/56 (2006.01)

Patent

CA 2392350

A hematological assay is described in which the blood coagulation potential of a body fluid is assessed by reacting a sample of the body fluid with an amount of an activator reagent comprising: (a) a predetermined amount of factor Xa or a hematologically equivalent mutant thereof, and (b) a predetermined amount of factor Va, a hematologically equivalent mutant thereof or an enzyme activating endogenous factor V, (c) (optionally) phospholipids. The reagent may be dry (e.g. lyophilised) or in an aqueous solution preferably buffered to a pH from 6 to 10 (preferably 7 to 8), if desired incubating, if necessary inducing coagulation by the addition of one or more coagulation accelerants such as calcium chloride, and establishing a value indicative of the coagulation potential, e.g. by measuring the time to clotting on an optical coagulometer or through use of a chromogenic substrate. It is preferred to use at (b) factor V activator from purified Russell's Viper venom (RVV-V). An activator reagent is also described containing the components mentioned above preferably in one or more buffer solutions or in dried, e.g. lyophilised form.

L'invention concerne un dosage hématologique dans lequel le pouvoir de coagulation du sang d'un liquide biologique est évalué, consistant à faire réagir un échantillon du liquide biologique avec une dose d'un réactif activateur comprenant (a) une quantité prédéterminée de facteur Xa ou d'un mutant hématologiquement équivalent de celui-ci, (b) une quantité prédéterminée de facteur Va, d'un mutant hématologiquement équivalent de celui-ci ou d'une enzyme activant le facteur V endogène, et (c) (éventuellement) des phospholipides, le réactif pouvant être sec (lyophilisé, par exemple) ou en solution aqueuse de préférence tamponnée à un pH situé entre 6 et 10 (de préférence 7 et 8), et, si on le souhaite, incubé, si nécessaire, à induire une coagulation par addition d'un ou plusieurs accélérateurs de coagulation, tel que le chlorure de calcium, et à établir une valeur indicative du pouvoir de coagulation, en mesurant par exemple le temps de coagulation à l'aide d'un coagulomètre optique ou d'un substrat chromogène. Il est préférable d'utiliser au point (b) un activateur du facteur V du venin de vipère Russell (RVV-V). L'invention concerne également un réactif activateur contenant les composants mentionnés ci-dessus de préférence dans une ou plusieurs solutions tampons ou sous forme sèche, lyophilisée, par exemple.

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