C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/70 (2006.01) A01N 63/00 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 39/21 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01)
Patent
CA 2645414
A method for monitoring ARV resistance, to determine viral fitness, and to forecast possible drug failure utilizes two nucleic acid sequences. One nucleic acid includes a retroviral nucleic acid devoid of at least a majority of the sequence for one of the two long terminal repeat regions. A second nucleic acid, includes a retroviral nucleic acid sequence devoid of the sequences encoding an envelope gene and the second long terminal repeat region of the retrovirus. The method allows the rapid cloning of an amplicon into an HIV-1 genome vector through recombination/gap repair in organisms such as yeast. The vectors can be directly passed to a mammalian cell line which has been specifically engineered to produce replication competent HIV-1 particles. The susceptibility of an isolate to any of several ARVs, i.e. PRIs, NRTIs, NNRTIs, T20, as well as entry and integrase inhibitors in development/clinical trials, may be tested.
Selon l'invention, une méthode de surveillance de la résistance aux ARV, de détermination d'adéquation aux virus et de prévention d'échecs possibles du médicament utilise deux séquences d'acides nucléiques. L'un des acides nucléiques inclut un acide nucléique rétroviral n'incluant pas au moins la majorité des séquences codant pour l'une des deux régions terminales de répétition longue. Un second acide nucléique inclut une séquence d'acide nucléique rétroviral ne contenant pas les séquences codant pour un gène de l'enveloppe et la seconde région de répétition terminale longue du rétrovirus. La méthode permet le clonage rapide d'un amplicon dans un vecteur de type génome de VIH-1 par recombinaison/réparation d'espaces vides dans des organismes tels que les levures. Les vecteurs peuvent être directement transmis à une lignée cellulaire de mammifère spécifiquement conçue pour produire des particules de VIH-1 aptes à la réplication. La sensibilité d'un isolat à l'un quelconque des ARV parmi les PRI, les NRTI, les NNRTI, T20, ainsi qu'à des inhibiteurs d'entrée et d'intégrase dans des essais de développement ou cliniques, peut ainsi être testée.
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Case Western Reserve University
LandOfFree
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