C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/52 (2006.01) C07K 1/00 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 9/26 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 9/54 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01) A61K 38/11 (2006.01)
Patent
CA 2348938
The present invention relates to a method of selecting a protein variant having reduced immunogenicity as compared to the parent protein comprising the steps of screening a random peptide display package library with antibodies raised against any protein of interest, sequencing the amino acid sequence of the antibody binding peptides, or the DNA sequence encoding the antibody binding peptides, identifying epitope patterns of a protein by sequence alignment of the reactive peptide sequence, localisation of epitope patterns on the primary 3-dimensional structure of the parent protein, defining an epitope area including amino acids situated within 5 .ANG. from the epitope amino acids, and affecting antibody binding to the epitope, changing the localised epitope patterns, or amino acids defining the epitope area of the parent protein by genetical engineering mutations of a DNA sequence encoding the parent protein without impairing functionality of the protein using the emerging epitope database for eliminating amino acid substitutions creating new or duplicating existing epitope patterns, introducing the mutated DNA sequence into a suitable host, culturing said host and expressing the protein variant, and evaluating the immunogenicity of the protein variant using the parent protein as reference. The invention further relates to the protein variant and use thereof, as well as to a method for producing said protein variant.
L'invention concerne un procédé de sélection d'un variant protéique dont l'antigénicité est réduite en comparaison avec la protéine apparentée. Ce procédé consiste à cribler une banque peptidique à affichage aléatoire présentant des anticorps luttant contre toute protéine d'intérêt, à séquencer la séquence d'acides aminés des peptides se liant aux anticorps ou la séquence d'ADN codant pour les peptides se liant aux anticorps, à identifier les modèles de site antigénique d'une protéine par l'alignement de la séquence peptidique réactive et par la localisation de modèles de sites antigéniques sur la première structure tridimensionnelle de la protéine apparentée, à définir un site antigénique comprenant les acides aminés se trouvant à 5 .ANG. des acides aminés du site antigénique et à affecter les anticorps se liant au site antigénique, puis à modifier les modèles de sites antigéniques ou les acides aminés définissant le site antigénique de la protéine apparentée par les mutations de génie génétique d'une séquence d'ADN codant pour la protéine apparentée sans entraver la fonctionnalité de la protéine utilisant la base de données de sites antigéniques émergents servant à éliminer les substitutions d'acides aminés créant ou reproduisant des modèles de sites antigéniques existants, à introduire la séquence d'ADN mutée dans un hôte convenable, à cultiver cet hôte et à exprimer le variant protéique puis finalement à évaluer l'antigénicité du variant protéique à l'aide d'un repère tel que la protéine apparentée. L'invention concerne également le variant protéique et son utilisation ainsi que son procédé de production.
Ernst Steffen
Olsen Arne Agerlin
Roggen Erwin Ludo
Novozymes A/s
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1501319