Generation of nucleic acid molecules

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P

Patent

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Details

C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2677111

The present invention relates generally to methods for generating single stranded nucleic acid molecules following enhanced solid phase polynucleotide amplification. The present invention employs an amplification reaction using primers with differential priming properties at particular annealing conditions or an immobilised primer nested between two aqueous phase primers. Thus, by primer design, solid support primer participation is enhanced relative to aqueous phase primers. The subject invention further provides methods for labelling solid matrices with single and double stranded nucleic acid molecules. Kits for generating single stranded nucleic acid molecules and for conducting amplification reactions also form part of the present invention. The present invention further provides amplification systems for the generation of single stranded nucleic acid molecules optionally labelled with a reporter molecule and their use inter alia as labels, primers and probes.

La présente invention porte d'une manière générale sur des procédés pour générer des molécules d'acide nucléique simple brin après amplification améliorée de polynucléotides en phase solide. La présente invention emploie une réaction d'amplification à l'aide d'amorces ayant des propriétés d'amorçage différentiel à des conditions d'annelage particulières ou d'une amorce immobilisée nichée entre deux amorces en phase aqueuse. Ainsi, par une mise au point d'amorce, la participation d'une amorce sur support solide est augmentée par rapport aux amorces en phase aqueuse. L'invention porte également sur des procédés pour marquer des matrices solides par des molécules d'acide nucléique simple et double brin. Des coffrets pour générer des molécules d'acide nucléique simple brin et pour conduire des réactions d'amplification font également partie de la présente invention. La présente invention porte également sur des systèmes d'amplification pour la génération de molécules d'acide nucléique simple brin, marquées de façon facultative par une molécule raporteuse et sur leur utilisation entre autres comme marqueurs, amorces et sondes.

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