C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2733186
The application provides methods for improving the detection accuracy of the binding of labeled nucleic acid probes, such as those used in PCR reactions. One such method comprises measuring the label intensity, e.g. fluorescence, at two different temperatures, a higher temperature and a lower temperature, and then calculating the ratio of the label intensity at the lower temperature over the label intensity at the higher temperature. Another method comprises measuring the label intensity at least two points in time post-PCR and calculating the slope of the label intensity as a function of time. Measuring the hybridization kinetics of the probe binding to the target nucleic acid allows an on-rate slope to be calculated which gives this method good specificity of detection.
L'invention concerne des procédés pour améliorer la précision de détection de la liaison de sondes d'acide nucléique marquées, telles que celles utilisées dans des réactions de PCR. Un tel procédé comporte la mesure de l'intensité de marqueur, par exemple par fluorescence, à deux températures différentes, une température supérieure et une température inférieure, puis le calcul du rapport de l'intensité de marqueur à la température inférieure sur l'intensité de marqueur à la température supérieure. Un autre procédé comporte la mesure de l'intensité de marqueur au niveau d'au moins deux points dans la post-PCR dans le temps, et le calcul de la pente de l'intensité de marqueur en fonction du temps. Une mesure des cinétiques d'hybridation de la liaison de sonde à l'acide nucléique cible permet à une pente du compromis d'être calculée, ce qui donne au procédé une bonne spécificité de détection.
Boyes Barry Edward
Link John Robert
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Smiths Detection Inc.
LandOfFree
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