C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/00 (2006.01) C07K 14/16 (2006.01) C12N 15/861 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2495546
Various methods for propagating and rescuing multiple serotypes of replication- defective adenovirus in a single adenoviral E1-complementing cell line are disclosed. Typically, replication-defective adenovirus vectors propagate only in cell lines which express E1 proteins of the same serotype or subgroup as the vector. The disclosed methods offer the ability to propagate vectors derived from multiple adenoviral serotypes in a single production cell line which expresses E1 proteins from a single serotype. Propagation in this manner is accomplished by providing all or a portion of an E4 region in cis within the genome of the replication-defective adenovirus. The added E4 region or portion thereof is cloned from a virus of the same or highly similar serotype as that of the E1 gene product(s) of the complementing cell line. Interaction between the expressed E1 of the cell line and the heterologous E4 of the replication-defective adenoviral vectors enables their propagation and rescue. The invention bypasses a need in the art to customize specific cell lines to the serotype or subgroup of the adenoviral vector being propagated and enables one to easily and rapidly develop alternative adenoviral serotypes as gene delivery vectors for use as vaccines or as a critical component in gene therapy.
L'invention concerne diverses méthodes de propagation et de récupération de multiples sérotypes d'adénovirus à réplication défectueuse dans une seule lignée cellulaire adénovirale complémentaire de E1. Les vecteurs d'adénovirus à réplication défectueuse se propagent en général uniquement dans les lignées cellulaires exprimant les protéines E1 du même sérotype ou sous-groupe que celui du vecteur. Les méthodes de l'invention permettent de propager des vecteurs dérivés de multiples sérotypes adénoviraux dans une seule lignée cellulaire de production exprimant les protéines E1 à partir d'un seul sérotype. Cette propagation est mise en oeuvre grâce à l'utilisation de toute ou d'une partie d'une région E4 in cis dans le génome de l'adénovirus à réplication défectueuse. La région E4 ajoutée, ou une partie de celle-ci, est clonée à partir d'un virus du même sérotype ou d'un sérotype hautement semblable à celui des produits géniques E1 de la lignée cellulaire complementaire. L'interaction entre le produit E1 exprimé de la lignée cellulaire et le produit E4 hétérologue des vecteurs adénoviraux à réplication défectueuse permet la propagation et la récupération de ceux-ci. L'invention résoud un problème qui fait état de la nécessité, dans le domaine, d'adapter les lignées cellulaires spécifiques au sérotype ou sous-groupe du vecteur adénoviral propagé, et permet de mettre au point facilement et rapidement des sérotypes adénoviraux de remplacement en tant que vecteurs d'apport de gènes utilisés en tant que vaccins ou constituants critiques en thérapie génique.
Bett Andrew J.
Casimiro Danilo R.
Chastain Michael
Emini Emilio A.
Kaslow David C.
Merck & Co. Inc.
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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