Polynucleotide amplification analysis using a...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – M

Patent

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C12M 1/40 (2006.01) B01D 61/18 (2006.01) B01D 67/00 (2006.01) B01D 71/02 (2006.01) B01J 19/00 (2006.01) B01L 3/00 (2006.01) B01L 7/00 (2006.01) C12M 1/26 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01) C12M 3/00 (2006.01) C12M 3/08 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) A61B 17/04 (2006.01) B01F 5/06 (2006.01)

Patent

CA 2134475

Disclosed are devices for amplification a preselected polynycleotide in a sample by conducting a polynucleotide polymeriza- tion reaction. The devices comprise a substrate microfabricated to define a sample inlet port (16A) and a mesoscale flow system (20), which extends from the inlet port (16A). The mesoscale flow system (20) includes a polynucleotide polymerization reaction chamber (22) in fluid communication with the inlet port which is provided with reagents required for polymerization and amplifi- cation of a preselected polynucleotide. In one embodiment the devices may be utilized to implement a polymerase chain reaction (PCR) in the reaction chamber (PCR chamber). The PCR chamber (22) is provided with the sample polynucleotide, polymerase, nucleoside triphosphates, primers and other reagents required for the polymerase chain reaction, and the device is provided with means for thermally controlling the temperature of the contents or the reaction chamber at a temperature controlled to dehybrid- ize double stranded polynucleotide, to anneal the primers, and to polymerize and amplify the polynucleotide.

L'invention se rapporte à des dispositifs d'amplification d'un polynucléotide présélectionné dans un échantillon, et qui consiste à effectuer une amplification enzymatique du polynucléotide. Ces dispositifs comprennent un substrat dont la microfabrication permet de définir un orifice (16A) d'entrée d'échantillon ainsi qu'un système d'écoulement (20) à mésoéchelle qui s'étend à partir de l'orifice d'entrée (16A). Le système d'écoulement à mésoéchelle (20) comprend une chambre (22) d'amplification enzymatique de polynucléotide, placée en communication fluide avec l'orifice d'entrée, et qui est alimentée en réactifs requis pour la polymérisation et l'amplifiction d'un polynucléotide présélectionné. Selon un mode de réalisation, ces dispositifs peuvent être utilisés pour effectuer une amplification enzymatique (PCR) dans la chambre d'amplification (chambre PCR). Celle-ci (22) comprend le polynucléotide échantillon, l'enzyme d'amplification, les triphosphates de nucléoside, les amorces et autres réactifs requis pour effectuer l'amplification, et le dispositif est pourvu d'éléments de régulation thermique de la température du contenu de la chambre d'amplification, à un niveau permettant de déshybrider un polynucléolide bicaténaire, de circulariser les amorces, de polymériser et d'amplifier le polynucléotide par voie enzymatique.

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