Use of ribozymes for functionating genes

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C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/11 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2319112

Novel double stranded DNAs, expression vectors and methods for their use are provided in which the intracellular expression of the double stranded DNAs is used to alter the phenotype of a target cell so that the function of a target nucleic acid that includes a nucleotide sequence encoding a motif of interest can be determined using a combinatorial ribozyme library. The members of the library are catalytic RNAs that disrupt the expression of the transcription product of the target nucleic acid. Disruption of transcription product expression results in an altered cell phenotype which is used to determine the function of the target nucleic acid. The specific phenotype or response may be associated with normal cellular processes, or it may contribute to the generation of pathogenesis involved in disease development. The compositions find use in high-throughput screens to assign gene functions. When associated with a pathogenic phenotype, these genes or their gene products can constitute therapeutic targets for treatment of diseases. The complete sequence of the gene containing the target nucleic acid need not to be known for the method to be used successfully.

Nouveaux A D N bicaténaires, vecteurs d'expression et leurs procédés de mise en application consistant à utiliser l'expression intracellulaire de ces A D N bicaténaires afin de modifier le phénotype d'une cellule ciblée, de façon à pouvoir déterminer la fonction d'un acide nucléique ciblé comprenant une séquence de nucléotides codant un motif recherché au moyen d'une banque combinatoire de ribozymes. Les éléments de cette banque sont des ARN catalytiques qui interrompent l'expression du produit de transcription de l'acide nucléique ciblé. L'interruption de l'expression du produit de transcription permet d'obtenir un phénotype de cellule modifié servant à déterminer la fonction de l'acide nucléique ciblé. Le phénotype ou la réponse spécifiques peuvent être associés à des processus cellulaires normaux ou contribuer à la génération de pathogenèses jouant un rôle dans l'évolution de maladies. Ces compositions sont appropriées à une mise en application dans des cribles très productifs servant à déterminer les fonctions de gènes. Quand ils sont associés à un phénotype pathogène, ces gènes ou leurs produits peuvent constituer des cibles thérapeutiques servant à traiter des maladies. Il n'est pas nécessaire de connaître la totalité de la séquence du gène contenant l'acide nucléique ciblé pour mettre en application ce procédé avec succès.

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