C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/87 (2006.01) C12Q 1/44 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 20/04 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01) C40B 30/08 (2006.01) C40B 40/02 (2006.01) C40B 40/08 (2006.01) C40B 40/10 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01)
Patent
CA 2648030
According to particular exemplary aspects, DNA target site binding and cleavage properties of native, variant or modified homing endonucleases (HE) (e.g., LAGLIDAG (LHE), HNH, His-Cys Box, GIY-YIG, I-SspI-type, and fusions, muteins or variants thereof ) in solution are recapitulated on the cell surface (e.g., as assessed by flow cytometric analysis) to provide for novel cells expressing one or more cell surface HEs (e.g., expressing one or more HE binding and/or cleavage specificities), novel cell libraries, and high-throughput methods for assessing target site binding, target site cleavage. The rapid analysis of HE and LHE-DNA interactions on the cell surface with concurrent sorting options provides for high-throughput library screening affording rapid identification, analysis and isolation of novel HEs or LHEs having novel sequence specificities. Such novel sequence specificities, obtained by said methods provide novel methods for introducing targeted DNA-strand cleavage events, and novel chromatin immunoprecipitation methods (CHIP methods).
Conformément à des aspects particuliers donnés à titre d'exemple, des propriétés de liaison et de clivage de site cible ADN d'endonucléases ciblées natives, variantes ou modifiées (HE) (par exemple, LAGLIDAG (LHE), HNH, His-Cys Box, GIY-YIG, I-SspI-type, et fusions, mutéines ou variantes de ces derniers ) en solution sont récapitulées sur la surface cellulaire (par exemple, comme évalué par analyse de cytométrie de flux) pour prévoir de nouvelles cellules exprimant une ou plusieurs surfaces cellulaires HE (par exemple, exprimant une ou plusieurs liaisons HE et spécificités de clivage), de nouvelles bibliothèques de cellules et de procédés à haut rendement pour l'évaluation de liaison de sites cibles, clivage de sites cibles. L'analyse rapide de HE et d'interactions LHE-ADN sur la surface cellullaire avec des options de tri concurrentes fournit un tri de bibliothèques à haut rendement permettant une identification rapide, une analyse et un isolement de nouveaux HE ou LHE ayant de nouvelles spécificités séquentielles. De telles nouvelles spécificités séquentielles obtenues par lesdits procédés fournissent de nouveaux procédés d'introduction d'événements de clivage de brins d'ADN ciblés, et de nouveaux procédés d'immunoprécipitation de la chromatine.
Children's Hospital & Regional Medical Center
Smart & Biggar
LandOfFree
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