C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 9/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/44 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01)
Patent
CA 2508610
The present invention provides a method of detecting a nuclease-mediated cleavage of a target nucleic acid through hybridizing a target nucleic acid to a fluorescently labeled oligonucleotide probe complementary to the target nucleic acid and containing a flourophor at one terminus and a quenching group at the other terminus. When the probe is unhybridized to the target nucleic acid, the probe adopts a conformation that places the flourophor and quencher in such proximity that the quencher quenches the flourescent signal of the flourophor and formation of the probe-target hybrid causes sufficient separation of the flourophor and quencher to reduce quenching of the flourescent signal of the flourophor. Once hybrized, the method contacts the probe-target hybrid with an agent having nuclease activity in an amount sufficient to selectively cleave the target nucleic acid and thereby release the intact probe. Detecting the release of the probe is then measured by following a decrease in the flourescent signal of the flourophor as compared to the signal of the probe-target hybrid.
La présente invention concerne une technique de détection de clivage induit par nucléase d'un acide nucléique cible via l'hybridation d'un acide nucléique cible avec une sonde oligonucléotide marquée par fluorescence complémentaire de l'acide nucléique cible et contenant un fluorophore à une terminaison et un groupe d'extinction à l'autre terminaison. Lorsque la sonde est hybridée avec l'acide nucléique, cette sonde adopte une conformation qui place le fluorophore et l'extincteur dans une telle proximité que l'extincteur éteint le signal fluorescent du fluorophore et la formation hybride sonde-cible entraîne une séparation suffisante du fluorophore et de l'extincteur pour réduire l'extinction du signal fluorescent du fluorophore. L'hybridation étant faite, cette technique met l'hybride sonde-cible en contact avec un agent possédant une activité nucléase dans une quantité suffisante pour cliver sélectivement l'acide nucléique cible et libère ainsi la sonde intacte. On mesure ensuite la détection de la libération de la sonde en suivant un affaiblissement du signal fluorescent du fluorophore comparé au signal de l'hybride sonde-cible.
O'connell John F.
Olson Matthew W.
Torys Llp
Wyeth
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1591587