A - Human Necessities – 61 – P
Patent
A - Human Necessities
61
P
A61P 35/00 (2006.01) A61K 45/00 (2006.01)
Patent
CA 2530314
The present invention relates to an in vivo-assay to screen for anti- proliferative drugs, the assay comprising the steps of: (a) contacting cells of a primary cell culture or of an established cell line with a candidate substance, (b) subsequently or concomitantly with a candidate substance, contacting the cells with a growth factor, (c) processing the cells for immunofluorescence staining to detect APPL1 and APPL2 using an anti-APPL1 and/or 2 antibody, or alternatively using GFP-tagged APPL proteins stably or transiently expressed by the cells via transfection, (d) assessing the degree of colocalisation of APPL1 and/or 2 and the growth factor, the solubilisation of APPL1 and/or 2 and their translocation to the nucleus, (e) repeating steps (b) to (d) with cells not previously treated with the candidate substance, and (f) comparing the degree of colocalisation of APPL1 and/or 2 and the growth factor, the solubilisation of APPL1 and/or 2 and their translocation to the nucleus between the cells not previously treated with the candidate substance (untreated cells) and cells treated with the candidate substance (treated cells), wherein an altered degree of colocalisation of APPL1 and/or 2 and the growth factor, an altered solubilisation of APPL1 and/or 2 and/or their altered translocation to the nucleus in the treated vs. the untreated cells identifies the candidate substance as an anti-proliferative drug.
L'invention concerne un dosage in vivo permettant d'analyser des médicaments anti-prolifératifs. Ledit dosage consiste: a) à mettre en contact des cellules provenant d'une culture cellulaire primaire ou d'une lignée cellulaire établie avec une substance candidate; b) à mettre en contact lesdites cellules avec un facteur de croissance simultanément ou suite à la mise en contact des cellules avec la substance candidate; c) à traiter les cellules par coloration immunofluorescente afin de détecter APPL1 et APPL2 à l'aide d'un anti-APPL1 et/ou d'un anticorps 2, ou alternativement à l'aide de protéines APPL ciblées GFP exprimées de manière stable ou transitoire par les cellules via une transfection; d) à évaluer le degré de colocalisation de APPL1 et/ou 2 et du facteur de croissance, la solubilisation de APPL1 et/ou 2 et leur translocation dans le noyau; e) à répéter les étapes (b) à (d) avec des cellules qui n'ont pas été traitées auparavant avec la substance candidate; et f) à comparer le degré de colocalisation de APPL1 et/ou 2 et du facteur de croissance, la solubilisation de APPL1 et/ou 2 et leur translocation dans le noyau entre les cellules qui n'ont pas été traitées auparavant avec la substance candidate (cellules non traitées) et les cellules qui ont été traitées avec la substance candidate (cellules traitées). Un degré modifié de colocalisation de APPL1 et/ou 2 et du facteur de croissance, une solubilisation modifiée de APPL1 et/ou 2 et/ou leur translocation modifiée dans le noyau dans les cellules traitées par rapport aux cellules non traitées permet d'identifier la substance candidate comme étant un médicament anti-prolifératif.
Miaczynska Marta
Zerial Marino
Gowling Lafleur Henderson Llp
Max-Planck Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.v.
LandOfFree
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