Signal enhancement for fluorescence microscopy

G - Physics – 01 – N

Patent

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Details

G01N 21/64 (2006.01) G02B 21/00 (2006.01) G02B 21/36 (2006.01)

Patent

CA 2318892

Multi-photon excitation fluorescence microscopy is carried out by focusing an excitation beam (12) by an objective lens (20) onto a specimen (22) and collecting the multi-photon fluorescence light emitted from the specimen (22) to the objective lens (20) and directing the fluorescent light on an optical path to a detector (35). Fluorescent light emissions from the specimen (22) collected by a condenser lens (25) on the opposite side of the specimen from the objective lens (20) are directed to a dichoic mirror (30), which reflects the light photons back into the condenser lens (25) and thence into and through the objective lens (20) where they are directed on an optical path to the detector (35). Significantly increased fluorescent photon collection efficiency is obtained as well as improved image intensity of the detected fluorescent light.

Selon l'invention, on exécute une microscopie par fluorescence avec excitation de plusieurs photons, en concentrant un faisceau d'excitation (12) sur un échantillon (22), au moyen d'un objectif (20), et en recueillant la lumière fluorescente des photons émise à partir de l'échantillon (22) vers l'objectif (20), puis en dirigeant cette lumière fluorescente sur un trajet optique, vers un détecteur (35). Les émissions de lumière fluorescente provenant de l'échantillon (22) et recueillies, à partir de l'objectif (20), par une lentille de condensateur (25) située du côté opposé de l'échantillon, sont dirigées vers un miroir dichroïque (30), lequel réfléchit en retour les photons lumineux dans la lentille du condensateur (25) puis dans et à travers l'objectif (20) où elles sont dirigées sur un trajet optique, vers le détecteur (35). On augmente ainsi de manière importante le recueil de photons fluorescents de même qu'on améliore l'intensité d'image de la lumière fluorescente détectée.

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