C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/70 (2006.01) A61K 38/48 (2006.01) C07K 14/33 (2006.01) C12N 9/50 (2006.01) C12N 15/57 (2006.01)
Patent
CA 2593520
The invention relates to a method for producing polypeptides or proteins in a two-chain form by recombinant expression in E. coli host cells, whereby i) the polypeptide or protein exerts its biological activity as a two-chain polypeptide or protein, ii) the C-terminal amino acid group of the first chain is an Arg or Lys group, iii) the second chain of the protein/polypeptide, at its N terminus, has 1 to 20 amino acid groups and a pentapeptide sequence VPXGS referred to as PRS, wherein X may be any naturally occurring amino acid, wherein V represents Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro or Gly, P represents Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val or Gly, G represents Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe or Val and S represents Ser, Tyr, Trp or Thr; and (iv) the method comprises the following steps: a) modifying the polypeptide or protein on the nucleic acid level in such a manner that the polypeptide or protein in its modified form comprises the sequence VPXGS in its loop area, with X, V, P, G and S being defined as above; b) introducing the construct modified on the nucleic acid level into E. coli cells; c) cultivating and then lysing the host cells; and d) isolating the two-chain polypeptide or protein. According to a preferred embodiment of the invention, the polypeptide or protein is a botulinum neurotoxin, especially the botulinum neurotoxin (BoNT(A)) type A.
L'invention concerne un procédé servant à produire des polypeptides ou des protéines bicaténaires par expression recombinée dans des cellules hôtes E. coli. Selon l'invention, (i) le polypeptide ou la protéine exerce son activité biologique en tant que polypeptide ou protéine bicaténaire, (ii) le reste acide aminé C-terminal de la première chaîne est un reste Arg ou Lys, (iii) la deuxième chaîne de la protéine ou du polypeptide présente à l'extrémité N-terminale 1 à 20 restes acides aminés et une séquence pentapeptide VPXGS comme site de reconnaissance protéolytique, X représentant un acide aminé quelconque natif, V représentant Val, Leu, Ile, Ala, Phe, Pro ou Gly, P représentant Pro, Leu, Ile, Ala, Phe, Val ou Gly, G représentant Gly, Leu, Ile, Ala, Pro, Phe ou Val et S représentant Ser, Tyr, Trp ou Thr, et (iv) le procédé comprend les étapes suivantes : (a) modification du polypeptide ou de la protéine au niveau acide nucléique de sorte que le polypeptide ou la protéine dans sa forme modifiée présente la séquence VPXGS dans sa zone de boucle, X, V, P, G et S étant définis comme précédemment, (b) introduction dans des cellules E. coli de la structure modifiée au niveau acide nucléique, (c) culture puis lyse des cellules hôtes et (d) isolement du polypeptide ou de la protéine bicaténaire. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le polypeptide ou la protéine est une neurotoxine botulique, notamment la neurotoxine botulique de sérotype A (BoNT(A)).
Biotecon Therapeutics Gmbh
Gowling Lafleur Henderson Llp
Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa
LandOfFree
Recombinant expression of proteins in a disulfide-bridged,... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Recombinant expression of proteins in a disulfide-bridged,..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Recombinant expression of proteins in a disulfide-bridged,... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1607140