Methods for making nucleic acids

Details Methods for making nucleic acids Methods for making nucleic acids

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)

Patent

CA 2311333

Nucleic acids are made by adding a known nucleotide sequence to the 3' end of a first RNA having a known sequence at the 5' end to form a second RNA and reverse transcribing the second RNA to form a cDNA. In one embodiment, the first RNA is an amplified mRNA, the known sequence at the 5' end comprises a poly(T) sequence, the adding step comprises using a polyadenyltransferase to add a poly(A) sequence to the 3' end, the reverse transcribing step is initiated at a duplex region comprising the poly(T) sequence hybridized to the poly(A) sequence, the cDNA is converted to double-stranded cDNA by a polymerase initiating from a noncovalently joined duplex region, and the double-stranded cDNA is transcribed to form one or more third RNAs.

L'invention concerne la production d'acides nucléiques par adjonction d'une séquence nucléotidique connue à l'extrémité 3' d'un premier ARN possédant une séquence connue à l'extrémité 5' afin de former un deuxième ARN, puis par transcription inverse du deuxième ARN pour former un ADN complémentaire. Dans un mode de réalisation, le premier ARN est un ARN messager amplifié; la séquence connue à l'extrémité 5' comprend une séquence poly(T); la phase d'adjonction comprend l'utilisation d'une polyadényltransférase pour ajouter une séquence poly(A) à l'extrémité 3'; la phase de transcription inverse est initiée dans une région à double hélice comprenant la séquence poly(T) hybridée à la séquence poly(A); l'ADN complémentaire est converti en un ADN complémentaire double brin par une polymérase initiée à partir d'une région à double hélice à liaison non covalente; et l'ADN complémentaire double brin est transcrit pour former un ou plusieurs troisièmes ARN.

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