Chromatographic process for purification of albumin

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/14 (2006.01) C07K 1/18 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C07K 14/765 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)

Patent

CA 2359705

A process is provided for the preparation of a highly pure albumin solution the process comprising subjecting alba-min (preferably expressed and secreted by transformed yeast) to a series of chromatographic steps. Preferably, the process comprises the steps of positive mode cation exchange chromatography, positive mode anion exchange chromatography, positive mode affinity chromatography, negative mode affinity chromatography (preferably using immobilised aminophenylboronic acid), negative mode cation exchange chromatography, and negative or positive mode anion exchange chromatography. A process for reducing the level of nickel in an albumin solution is also disclosed, as is a recombinant albumin coding sequence comprising two or more in-frame translation stop codons. Also disclosed is a process for producing recombinant albumin, the process comprising culturing a fungal cell expressing a recombinant albumin coding sequence, wherein the cell has a reduced capacity of mannosylation of the recombinantly-expressed albumin.

L'invention concerne une technique de préparation d'une solution d'albumine très pure, ladite technique consistant à soumettre l'albumine (de préférence, exprimée et sécrétée par une levure transformée ) à une série d'opérations chromatographiques. Cette technique comprend, de préférence, les opérations suivantes: chromatographie par échange cationique en mode positif, chromatographie par échange anionique en mode positif, chromatographie par affinité en mode positif, chromatographie par affinité en mode négatif (utilisant, de préférence, un acide aminophénylboronique immobilisé), chromatographie par échange cationique en mode négatif, et chromatographie par échange anionique en mode positif ou négatif. L'invention concerne également une technique permettant de réduire le taux de nickel dans une solution d'albumine, sous forme d'une séquence de codage d'albumine de recombinaison, comprenant deux ou plusieurs codons de terminaison de translation internes au cadre. L'invention concerne, en outre, une technique de production d'albumine de recombinaison, consistant à cultiver une cellule fongique exprimant une séquence de codage d'albumine de recombinaison, cette cellule présentant une capacité de mannosylation de l'albumine exprimée par recombinaison réduite.

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