C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/10 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2683960
This disclosure concerns compositions and methods for genetically encoding and expressing prokaryotic tRNAs in eukaryotic cells. In some embodiments, the disclosure concerns methods and compositions for expressing unnatural amino acids in eukaryotic cells using orthogonal tRNA/synthetase pairs. In certain embodiments, the methods involve expressing prokaryotic tRNA/synthetase pairs in eukaryotic cells, for instance mammalian cells or yeast cells (such as those that are NMD-deficient), under the control of a pol III promoter, for instance a type-3 pol III promoter or an internal leader promoter. Also provided are cell lines that are NMD- deficient and methods of increasing the efficiency of UAA incorporation in a cell that include de-activating the NMD pathway in the cell.
La présente invention concerne des compositions et des procédés permettant de coder génétiquement et d'exprimer l'ARNt procaryote présent dans les cellules eucaryotes. Dans certains modes de réalisation, l'invention porte sur des procédés et des compositions permettant d'exprimer des acides aminés non naturels dans des cellules eucaryotes à l'aide de paires d'ARNt/synthétase orthogonales. Dans certains modes de réalisation, les procédés entraînent l'expression de paires d'ARNt/synthétase procaryotes dans les cellules eucaryotes, comme par exemple les cellules de mammifère ou les cellules de levure (telles que celles qui sont déficientes en NMD), sous le contrôle d'un promoteur pol III, par exemple un promoteur pol III de type 3 ou un promoteur principal interne. L'invention a également trait à des lignées cellulaires qui sont déficientes en NMD et à des procédés permettant d'accroître l'efficacité de l'incorporation du codon UAA dans une cellule et qui consistent notamment à désactiver la voie NMD dans la cellule.
Smart & Biggar
The Salk Institute For Biological Studies
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1619312