Procedure for extraction and use of hatching fluid from...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 9/50 (2006.01) C12N 9/64 (2006.01)

Patent

CA 2314608

A procedure is described for obtaining valuable endoproteases (or zonases) from hatchery-produced Atlantic salmon eggs. Synchronized hatching by for instance elevated temperature, is followed by filtration through cheese cloth. The filtrate (hatching fluid) may be stored for months or years (depending on conditions) without loss of activity. Extraneous matters are removed by centrifugation (16,000 g, 2 x 15 min) after addition of urea (2 or 4 M, or more). High purity zonases are obtained by simple chromatographic procedures (gel filtration, affinity chromatography, isoelectric focusing), yielding sequence-grade purity after all three steps are performed in sequence. All preparations of salmon zonases exhibit valuable enzymatic properties with regard to proteolysis, both in terms of catalysis and stability.

Procédé permettant d'obtenir des endoprotéases (ou zonases) ayant une valeur commerciale à partir d'oeufs de saumons de l'Atlantique produits dans des écloseries. L'éclosion synchronisée, par exemple par élévation de la température, est suivie par le filtrage à travers des toiles à fromage. Le filtrat (fluide d'éclosion) peut être stocké pendant des mois ou des années (selon les conditions) sans perte d'activité. Les matières étrangères sont éliminées par centrifugation (16.000g, 2 x 15 mn) après ajout d'urée (2 ou 4 M, ou plus). On obtient ainsi des zonases extrêmement pures par des procédures chromatographiques simples (filtration sur gel, chromatographie d'affinité, isoélectrofocalisation) qui permettent d'atteindre une pureté élevée une fois que ces trois phases ont été effectuées en séquence. Toutes les préparations de zonases de saumon possèdent des propriétés enzymatiques précieuses pour ce qui est de la protolyse, à la fois en termes de catalyse et de stabilité.

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