C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/02 (2006.01) C07K 1/107 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01)
Patent
CA 2180176
The present invention provides a method of synthesizing a fluorescently labeled protein in a cell free protein synthesis system, comprising the steps of: (a) incubating a sample of ribosomes obtained from a cell-free extract with plasmid DNA containing a coding sequence for a protein of interest, said sample incubated in a coupled transcription/translation medium together with an aminoacyl tRNA having fluorescent label; (b) partially purifying said fluorescently labeled protein by separating newly synthesized, fluorescently-labeled protein from other fluorescent components within said sample; (c) measuring the amount of protein synthesized; (d) determining fluorescence of newly synthesized protein; and (e) determining the biological activity of the newly synthesized protein.
La présente invention concerne un procédé de synthèse d'une protéine marquée par fluorescence dans un système de synthèse de protéines sans cellules, comprenant les étapes suivantes: (a) incubation d'un échantillon de ribosomes obtenus à partir d'un extrait sans cellules avec de l'ADN plasmide contenant une séquence de codage pour une protéine d'intérêt, ledit échantillon étant incubé dans un milieu de transcription/translation couplé avec un ARNt aminoacyle ayant un marqueur fluorescent; (b) vérification partielle de ladite protéine marquée par fluorescence en séparant la protéine marquée par fluorescence et nouvellement synthétisée par d'autres composants fluorescents contenus dans ledit échantillon; (c) mesure de la quantité de la protéine synthétisée; (d) détermination de fluorescence de la protéine synthétisée; et (d) détermination de l'activité biologique de cette protéine fraîchement synthétisée.
Hardesty Boyd
Kramer Gisela
Kudlicki Wieslaw
Borden Ladner Gervais Llp
Research Development Foundation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1631447