C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/01 (2006.01) C07K 14/65 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C07K 16/28 (2006.01) C12N 9/36 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2528202
Processes are described for recovering heterologous polypeptide from bacterial cells, including the periplasm and cytoplasm. One process involves culturing the bacterial cells, which cells comprise nucleic acid encoding phage lysozyme and nucleic acid encoding a protein that displays DNA-digesting activity, wherein these nucleic acids are linked to a first promoter, and nucleic acid encoding the heterologous polypeptide, which nucleic acid is linked to a second promoter, under certain conditions to produce a broth lysate; and recovering accumulated heterologous polypeptide from the broth lysate. Another process entails culturing bacterial cells that comprise nucleic acid encoding phage lysozyme, gene t, and nucleic acid encoding a protein that displays DNA-digesting activity under the control of a signal sequence for secretion of said DNA-digesting protein, wherein said nucleic acids are linked to one or more promoters, and nucleic acid encoding the heterologous polypeptide and a signal sequence for secretion of the heterologous polypeptide, which nucleic acid encoding the heterologous polypeptide is linked to a another promoter that is inducible, under certain conditions to produce a broth lysate; and recovering accumulated heterologous polypeptide from the broth lysate.
Les procédés décrits permettent de récupérer un polypeptide hétérologue de cellules bactériennes, y compris dans le périplasme et le cytoplasme. Dans l'un des procédés, on met en culture des bactéries contenant un acide nucléique codant un lysozyme de phage et un acide nucléique codant une protéine qui présente une activité de digestion de l'ADN, ces acides nucléiques étant liés à un premier promoteur et l'acide nucléique codant le polypeptide hétérologue étant lié à un deuxième promoteur. La culture des bactéries se fait dans certaines conditions et produit un lysat dans le bouillon. Par la suite, on récupère le polypeptide hétérologue accumulé dans le lysat. Dans un autre procédé, on met en culture des bactéries contenant l'acide nucléique codant le lysozyme de phage, le gène t et l'acide nucléique codant une protéine présentant une activité de digestion de l'ADN sous la régulation d'une séquence signal induisant la sécrétion de ladite protéine digérant l'ADN, lesdits acides nucléiques étant liés à un ou plusieurs promoteurs, et l'acide nucléique codant le polypeptide hétérologue et une séquence signal induisant la sécrétion du polypeptide hétérologue, dont l'acide nucléique codant ce dernier est lié à un autre promoteur que l'on peut induire, dans certaines conditions, pour produire un lysat dans le bouillon et on récupère le polypeptide hétérologue accumulé dans le lysat du bouillon.
Leung Woon-Lam Susan
Swartz James R.
Genentech Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1643270