C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/14 (2006.01) C07K 1/113 (2006.01) C07K 1/16 (2006.01) C07K 1/30 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C07K 14/61 (2006.01) C12N 1/06 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2444480
This invention entails a method for solubilizing and recovering, in bioactive and isolated form with retained native state configuration, a target peptide from a host organism in which the heterologous polypeptide is present in insoluble form. Broadly this method comprises (i) disrupting the host cell to produce a lysate (ii) recovering lysate precipitate containing the polypeptide (iii) resuspending the lysate precipitate in a denaturant-free, nan-buffered solubilization solution to produce a solubilization preparation that comprises both sodium hydroxide between about 8 and about 10 mM and the target peptide between about 1 and about 4 mg peptide per ml solubilization solution, wherein the resultant solubilization preparation has a pH of between about 9 and about 11.2; (iv) recovering supernatant from the solubilization preparation containing non- denatured target peptide. Optionally, stabilizing compounds and detergents are employed. The invention further comprises isolated insoluble proteins in bioactive form and native state configuration.
L'invention concerne un procédé de solubilisation et de récupération, dans une forme bioactive et isolée dont la configuration est maintenue à l'état natif, un peptide cible provenant d'un organisme hôte dans lequel le polypeptide hétérologue est sous forme insoluble. De manière générale, ce procédé consiste à : (I) dissoudre la cellule hôte pour obtenir un lysat, (II) récupérer le précipité de lysat qui renferme le polypeptide, (III) remettre en suspension le précipité de lysat dans une solution de solubilisation non tamponnée exempte d'agent dénaturant pour obtenir une préparation de solubilisation qui contient à la fois l'hydroxyde de sodium entre environ 8 et environ 10 mM et un peptide cible entre environ 1 et environ 4 mg de peptide par ml de solution de solubilisation, la préparation de solubilisation obtenue présentant un pH compris entre environ 9 et environ 11, 2; et enfin, (IV) récupérer le surnageant dans la préparation de solubilisation qui contient le peptide cible non dénaturé. Des composés stabilisants ainsi que des détergents peuvent être éventuellement utilisés. Par ailleurs, l'invention concerne des protéines insolubles isolées sous forme bioactive dont la configuration est à l'état natif.
Gonzalez-Villasenor Lucia Irene
Na
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1643370