Synthesis of fluorophore-labeled dna

Details Synthesis of fluorophore-labeled dna Synthesis of fluorophore-labeled dna

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2251643

Sequencing methods and methods for synthesizing DNA probes using mutant bacteriophage T4 DNA polymerases which have increased ability to incorporate modified nucleotides for the synthesis of long or short chains of complementary, modified, e.g., fluorophore-labeled DNA. In general, the mutant T4 DNA polymerases retain 3'5' exonuclease activity; hence, reduction or elimination of 3'5' exonuclease activity is not a prerequisite for efficient synthesis of a complementary fluorophore-labeled or other modified DNA. In fact, retention of 3'5' exonuclease activity increases accuracy of DNA replication, because these exonucleases proofread or edit the product of DNA replication.

Procédés de séquençage et de synthèse de sondes d'ADN faisant appel à des ADN polymérases T4 bactériophages mutantes dont l'aptitude à incorporer des nucléotides modifiés pour la synthèse de chaînes longues ou courtes d'ADN complémentaires et modifiés, par exemple marqués par fluorophores, a été accrue. En général, les ADN polymérases T4 mutantes conservent l'activité d'exonucléase 3'?5'; de ce fait, la réduction ou l'élimination de l'activité d'exonucléase 3'?5' n'est pas une condition préalable essentielle pour la synthèse efficace d'un ADN complémentaire marqué par fluorophore ou autrement modifié. En fait, l'aptitude à conserver l'activité d'exonucléase 3'?5' accroît la précision de la réplication d'ADN dans la mesure où ces exonucléases sont responsables de la correction d'épreuves ou de l'édition du produit de la réplication d'ADN.

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