C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/56 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01) G01N 33/86 (2006.01)
Patent
CA 2174328
A method for assaying body fluid samples containing heparin and a diagnostic kit are described. Since the reactions go to completion, timing of the assay is not required. The sample is mixed with a heparin-dependent protease inhibitor and either a heparin-independent irreversible inhibitor or a protease substrate. The coagulation enzyme (protease) is then added in a limiting quantity and it either distributes between the heparin-dependent inhibitor and the heparin-independent irreversible inhibitor, or the heparin-dependent inhibitor and the protease substrate. The distribution pattern of complex formation of the protease with the two inhibitors or the level of product of the protease-catalyzed hydrolysis of the substrate are used as measures of the heparin activity. The irreversible inhibitor is a peptidyl chloromethyl ketone and the substrate is a synthetic chromogenic or fluorogenic compound that produces a readily measured signal.
La présente invention concerne un procédé de dosage d'échantillons de liquides biologiques contenant de l'héparine et un matériel de diagnostic. Etant donné que les réactions sont menées à terme, le dosage ne nécessite aucun chronométrage. L'échantillon est mélangé à un inhibiteur de la protéase dépendant de l'héparine et soit à un inhibiteur irréversible indépendant de l'héparine, soit à un substrat de protéase. L'enzyme de coagulation (protéase) est ensuite ajoutée en quantité limitative et elle se répartit soit entre l'inhibiteur dépendant de l'héparine et l'inhibiteur irréversible indépendant de l'héparine, soit entre l'inhibiteur dépendant de l'héparine et le substrat de protéase. Le schéma de distribution de la formation complexe que la protéase constitue avec les deux inhibiteurs ou le niveau de produit résultant de l'hydrolyse du substrat catalysée par la protéase permettent de mesurer l'activité de l'héparine. L'inhibiteur irréversible est un peptidyle-chlorométhyle-cétone et le substrat un composé synthétique chromogénique ou fluorogénique produisant un signal mesuré facilement.
Manuel Reginald P.
Nesheim Michael E.
Mcfadden Fincham
Research Corporation Technologies Inc.
LandOfFree
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