C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/51 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01) G01N 33/15 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01)
Patent
CA 2661468
A tissue culture system for production of infectious hepatitis C virus is described. In particular, the invention provides recombinant monocistronic and bicistronic genomic constructs for production of virus, including constructs for production of wild-type HCV type 2a strain JFH1 and constructs for production of chimeric viruses comprising HCV proteins from strain JFH1 and a second HCV isolate (e.g., type 1a H77, type 1b Con1, or type 3a NZ1 or 452). Constructs of the invention also include a reporter gene to facilitate measurement of RNA replication and viral infectivity in cultures. The cell culture system may also include various factors that improve viral replication or infectivity, such as an RNA silencing suppressor (e.g., an influenza virus NS1 polypeptide) to inhibit host defense pathways or CD81 to facilitate viral entry into host cells. In addition, a neutralization assay using HCV grown in cell culture is described and neutralization titers measured by this assay have been found to correlate well with actual protection from HCV infection in vaccinated animals.
L'invention concerne un système de culture de tissu pour la production du virus infectieux de l'hépatite C. En particulier, l'invention concerne des constructions génomiques monocistroniques et bicistroniques recombinées pour la production d'un virus, dont des constructions géniques pour la production de la souche JFH1 de type 2a du VHC de type sauvage et des constructions géniques pour la production de virus chimères comprenant des protéines du VHC provenant de la souche JFH1 et d'un second isolat du VHC (par exemple H77 de type 1a, Con1 de type 1b ou NZ1 ou 452 de type 3a). Les constructions géniques de l'invention comprennent également un gène rapporteur pour faciliter la mesure de la réplication de l'ARN du risque d'infection virale dans les cultures. Le système de culture de cellules peut également comprendre différents facteurs qui améliorent la réplication ou le risque d'infection virale, tels qu'un suppresseur d'extinction d'ARN (par exemple un polypeptide NS1 du virus influenza) pour inhiber les voies de défense de l'hôte ou la protéine CD81 pour faciliter l'entrée virale dans les cellules hôtes. De plus, l'invention concerne un essai de mesure du degré de neutralisation utilisant le VHC provenant de la culture de cellules et on a trouvé que les mesures de neutralisation obtenues par cet essai sont bien corrélées avec la protection réelle contre une infection par le VHC chez des animaux vaccinés.
Choo Qui-Lim
Han Jang
Houghton Michael
Kwon Taewoo
Song Hyun Chul
Borden Ladner Gervais Llp
Novartis Ag
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1683439