C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01L 3/00 (2006.01)
Patent
CA 2549849
An improved assay for identifying and distinguishing one or more a single nucleotide polymorphisms in one or more target sequences of nucleic acid comprises, in a single-tube reaction system, three or more primers, two of which bind to a target nucleic acid sequence, flanking a SNP, so that the 3'- end of one or more first primers is adjacent to the 5'-end of a second primer, the two primers being selectively ligated and then amplified by a third primer to exponentially produce the complementary strand of the one or more target sequences. The other strand of the one or more target sequences are exponentially amplified by one or more hybridizable probes, each labeled with a different fluorophore, the fluorophore-labeled hybridizable probes being quenched until incorporation into and amplification of target nucleic acid products. Also provided is a method for identifying one or more SNPs in one or more target sequences of nucleic acid in each single through-hole of a nanoliter sampling array, and a kit for such a method containing a nanoliter sampling array chip, primer sequences, and reagents required to selectively ligate primers for amplification of desired target nucleic acid sequences.
Un essai amélioré permettant l'identification et la distinction d'un ou plusieurs polymorphismes à un seul nucléotide dans une ou plusieurs séquences cibles d'acide nucléique comprend, dans un système de réaction à une seule éprouvette, au moins trois amorces, dont deux se lient à une séquence d'acide nucléique cible ayant une région flanquante SNP de manière que la terminaison 3' d'un ou plusieurs premières amorces soit adjacente à la terminaison 5' d'une seconde amorce, les deux amorces étant liées sélectivement, puis amplifiées par une troisième amorce afin d'obtenir exponentiellement le brin complémentaire d'une ou plusieurs séquences cibles. L'autre brin d'une ou plusieurs séquences cibles est amplifié exponentiellement par une ou plusieurs sondes hybridables, chacune étant marquée par un fluorophore différent, lesdites sondes étant trempées jusqu'à incorporation et amplification des produits d'acide nucléique cibles. Un procédé d'identification d'un ou de plusieurs SNP dans une ou plusieurs séquences cibles d'acide nucléique dans chaque trou passant d'un réseau d'échantillonnage nanolitre, ainsi qu'un kit pour un tel procédé contenant une puce de réseau d'échantillonnage nanolitre, des séquences d'amorces et des réactifs nécessaires pour ligaturer sélectivement les amorces en vue de l'amplification des séquences cibles souhaitées d'acide nucléique.
Biotrove Inc.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Life Technologies Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1700619