Homogeneous diagnostic assay method utilizing simultaneous...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2261607

The present invention relates to a method, kit and reagent composition for determining the presence of a target nucleic acid in a sample using a two- stage target cycling reaction. During stage 1 of the reaction, the target nucleic acid hybridizes with a probe nucleic acid to effectuate release of an activator into the assay medium. During stage 2 of the reaction, a target analog-anchor complex is cleaved by the activator, which accomplishes the dual purpose of releasing the target analog into the assay medium, and the initiation of signal generation. The released target analog then restarts the cyclic reaction by binding to a second probe, which effectuates release of a second activator, and so on. This cyclic reaction gives rise to an increase in the amount of signal generated from a single target nucleic acid molecule in the sample, which greatly enhances the level of target detection that can be expected.

La présente invention concerne un procédé, un kit et une composition de réactif destinés à déterminer la présence d'un acide nucléique cible dans un échantillon, ceci se faisant par réaction cyclique à deux étapes de la cible. Au cours de la première étape de la réaction, l'acide nucléique cible s'hybride avec un acide nucléique sonde pour libérer un activateur dans le milieu du dosage. Au cours de la deuxième étape de la réaction, un complexe analogue de cible-fixateur est clivé par l'activateur, qui accomplit la double fonction de libérer l'analogue de cible dans le milieu du dosage et de lancer l'émission de signaux. L'analogue de cible libéré relance ensuite la réaction cyclique par liaison à une deuxième sonde, qui libère un deuxième activateur, et ainsi de suite. Cette réaction cyclique entraîne une augmentation des signaux émis dans un échantillon à partir d'une seule molécule d'acide nucléique cible, ce qui permet d'améliorer grandement le degré de détection de la cible auquel on peut s'attendre.

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