Sensitive detection of cell surface markers on viable cells

Details Sensitive detection of cell surface markers on viable cells Sensitive detection of cell surface markers on viable cells

G - Physics

01

N

G01N 33/533 (2006.01) B01J 13/04 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/554 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)

Patent

CA 2234582

Magnetofluorescent liposomes are size selected by membrane extrusion and magnetic separation. The selection process provides a highly fluorescent population of liposomes, which are used as a fluorescent labeling agent. Intensity of fluorescent staining can be increased 100-1000-fold without increased background fluorescence, when compared to conventional fluorochrome- conjugated antibodies. The highly sensitive staining permits detection of cell surface markers expressed at low levels on the cell surface. Of particular interest is the detection of normally secreted certain cytokines, e.g. interferon .gamma., and IL-10 on the surface of lymphocytes. Cells that are positive for surface expression of these cytokines may be quantitated or separated for further use.

L'invention se rapporte à des liposomes magnétofluorescents qui sont sélectionnés et calibrés par extrusion membranaire et par séparation magnétique. Une fois la sélection pratiquée, on obtient une population fortement fluorescente de liposomes, lesquels sont utilisés comme agents de marquage fluorescents. L'intensité du marquage peut être accrue de 100 à 1000 fois sans qu'il y ait augmentation de la fluorescence de fond, en comparaison avec des anticorps classiques conjugués au fluorochrome. La coloration hautement sensible permet de détecter des marqueurs de surface de cellules exprimés à des bas niveaux sur la surface de la cellule. Il est particulièrement intéressant de détecter certaines cytokines qui sont normalement sécrétées, notamment l'interféron .gamma., et l'IL-10 sur la surface de lymphocytes. Les cellules qui révèlent l'expression en surface de ces cytokines peuvent être dosées ou séparées pour être utilisées par la suite.

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