C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2308004
Disclosed are compositions and a method for amplification of nucleic acid sequences of interest. The method is based on stand displacement replication of the nucleic acid sequences of interest by multiple primers. In one preferred form of the method, referred to as multiple strand displacement amplification, two sets of primers are used, a right set and a left set. The primers in the right set are complementary to one strand of the nucleic acid molecule to be amplified and the primers in the left set are complementary to the opposite strand. The 5' end of primers in both sets are distal to the nucleic acid sequence of interest when the primers have hybridized to the nucleic acid sequence molecule to be amplified. Amplification proceeds by replication initiated at each primer and continuing through the nucleic acid sequence of interest. A key feature of this method is the displacement of intervening primers during replication by the polymerase. In another preferred form of the method, referred to as whole genome strand displacement amplification, a random set of primers is used to randomly prime a sample of genomic nucleic acid (or another sample of nucleic acid of high complexity). By choosing a set of primers which are sufficiently random, the primers in the set will be collectively, and randomly, complementary to nucleic acid sequences distributed throughout nucleic acid in the sample. Amplification proceeds by replication with a highly processive polymerase initiated at each primer and continuing until spontaneous termination. A key feature of this method is the displacement of intervening primers during replication by the polymerase. In this way, multiple overlapping copies of the entire genome to be synthesized in a short time.
L'invention concerne des compositions et un procédé servant à amplifier des séquences nucléotidiques dignes d'intérêt. Ce procédé est fondé sur la réplication des séquences nucléotidiques étudiées par déplacement de brins au moyen d'amorces multiples. Dans un mode de réalisation préféré, qui porte le nom d'amplification par déplacements multiples de brins, on utilise deux ensembles d'amorces, un de gauche et un de droite. Les amorces de l'ensemble de droite sont complémentaires d'un brin de la molécule d'acide nucléique que l'on veut amplifier, les amorces de l'ensemble de gauche étant complémentaires du brin opposé. Dans les deux ensembles, l'extrémité 5' des amorces est distale par rapport à la séquence nucléotidique étudiée, les amorces s'étant hybridées avec la molécule d'acide nucléotidique à amplifier. L'amplification se fait par la réplication, lancée auprès de chaque amorce et se poursuivant à travers la séquence nucléotidique étudiée. Un des éléments principaux de ce procédé consiste à déplacer les amorces intervenantes lors de la réplication par la polymérase. Dans un autre mode de réalisation préféré, qui a pour titre "amplification par déplacement de brin du génome entier", on utilise un ensemble aléatoire d'amorces pour amorcer de manière aléatoire un échantillon d'acide nucléique génomique (ou tout autre échantillon d'un acide nucléique de grande complexité). Comme on choisit un ensemble d'amorces d'une manière suffisamment aléatoire, les amorces de l'ensemble sont collectivement et aléatoirement complémentaires des séquences nucléotidiques distribuées à travers l'acide nucléique dans l'échantillon. L'amplification se fait par la réplication avec une polymérase possédant une forte capacité de réaction, lancée auprès de chaque initiateur et se poursuivant jusqu'à la fin spontanée. Un élément clé de ce procédé est le déplacement des amorces intervenantes pendant la réplication par la polymérase. Cela permet de synthétiser en un laps de temps très court plusieurs copies chevauchantes du génome entier.
Smart & Biggar
Yale University
LandOfFree
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