Methods for two-dimensional conformation-dependent...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2477345

Methods are provided for separating linear nucleic acid fragments based on their conformation. The methods are based on novel two-dimensional gel electrophoresis techniques. In one aspect the method comprises electrophoresing a sample of nucleic acids in a first dimension said sample through a gel matrix under a first set of pre-determined electrophoresis conditions; electrophoresing said gel matrix in a second dimension under a second set of electrophoresis conditions, such that linear nucleic acid fragments of equal length but having different conformation are separated; said first and second electrophoresis conditions are different, such that in one of said dimensions electrophoresis allows separation of linear nucleic acid fragments based on conformation and length, and in the other of said dimensions electrophoresis allows separation of the sample fragments based substantially on length. Said difference is preferably established with a chemical agent capable of reducing conformational differences between linear nucleic acids fragments.

La présente invention a trait à des procédés permettant la séparation de fragments d'acides nucléiques linéaires en fonction de leur conformation. Les procédés sont basés sur de nouvelles techniques d'électrophorèse sur gel à deux dimensions. Dans un mode de réalisation, le procédé comprend l'électrophorèse d'un échantillon d'acides nucléiques dans une première dimension à travers une matrice de gel dans un premier ensemble de conditions d'électrophorèse prédéterminées ; l'électrophorèse de ladite matrice de gel dans une deuxième dimension dans un deuxième ensemble de conditions d'électrophorèse, de sorte que les fragments d'acides nucléiques linéaires de même longueur mais présentant une conformation différente soient séparés ; lesdites premières et deuxièmes conditions sont différentes, de sorte que dans une desdites dimensions l'électrophorèse permet la séparation de fragments d'acides nucléaires linéaires en fonction de la conformation et la longueur, et dans l'autre desdites dimensions l'électrophorèse permet la séparation de fragments de l'échantillon essentiellement en fonction de longueur. De préférence, ladite différence est établie au moyen d'un agent chimique capable de réduire les différences de conformation entre les fragments d'acides nucléaires linéaires.

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