C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) C12N 5/02 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2608913
The present invention relates to novel selection marker vectors, and methods for using these vectors to generate stable gene expression systems in eukaryotic cells. More specifically, the present invention provides compositions and methods utilizing any enzyme useful in the eukaryotic sterol/cholesterol biosynthetic pathway, such as a 3-ketosteroid reductase, as a metabolic selection marker to select transfected cells. In one embodiment, the method comprises transfecting cells that are auxotrophic for cholesterol with a vector encoding 3-ketosteroid reductase and at least one heterologous protein, and selecting cells that have the ability to survive in medium lacking cholesterol and/or producing the heterologous protein in these cells in chemically defined and/or serum-free media.
L'invention concerne des nouveaux vecteurs de marqueurs de sélection et des procédés d'utilisation de ces vecteurs pour générer des systèmes d'expression génique stables dans des cellules eucaryotes. Plus spécifiquement, l'invention porte sur des compositions et sur des procédés d'utilisation de n'importe quelle enzyme utile dans la voie biosynthétique du stérol/cholestérol, telle que la 3- cétostéroïde réductase, en tant que marqueur de sélection métabolique pour sélectionner les cellules transfectées. Dans un mode de réalisation, le procédé consiste à transfecter des cellules qui sont autotrophiques pour le cholestérol, avec un vecteur codant pour la 3-cétostéroïde réductase et au moins une protéine hétérologue, et à sélectionner les cellules capables de survivre dans un milieu exempt de cholestérol et/ou à produire la protéine hétérologue dans ces cellules, dans des milieux définis chimiquement et/ou exempt de sérum.
Branco Luis
Sampey Darryl B.
Biofactura Inc.
Borden Ladner Gervais Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1729602