C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01)
Patent
CA 2513425
The polyprenyl phosphate: N-acetylhexosamine-1-phosphate transferase family are glycosyl transferase enzymes of interest in the development of antibacterial treatments. The bacterial proteins WecA and MraY are exemplary transferases, each of which catalyzes the transfer of a specific hexosamine 1- P from a soluble UDP-hexosamine substrate to a polyprenyl phosphate carrier at the membrane surface. The present invention provides a generalizable, high throughput, one-pot assay for this type of enzymatic activity by incorporating a solid-liquid, bead-based separation system to selectively adsorb the highly hydrophobic products of the reaction. By judicious choice of radiolabeled UDP- hexosamine precursor, the assay format can be used to quantitate the products of diverse members of this transferase family as well as enzymes that catalyze the further modification of these transferase products. Thus, the use of this flexible assay format allows biochemical and enzymologic analysis of many such membrane bound transferases.
La famille des polyprényl phosphate: N-acétylhexosamine-1-phosphate transférases regroupe des enzymes glycosyl transférases présentant un intérêt dans le développement de traitements antibactériens. Des exemples de ces transférases sont les protéines bactériennes WecA et MraY, qui catalysent chacune le transfert d'une hexosamine spécifique 1-P d'un substrat d'UDP-hexosamine soluble à un support de polyprényl phosphate au niveau de la surface membranaire. L'invention concerne une méthode de bioanalyse monotope à haut débit généralisable permettant de mesurer ce type d'activité enzymatique par incorporation d'un système de séparation solide-liquide à base de perles pour adsorber de façon sélective les produits hautement hydrophobes de la réaction. A l'aide d'un choix judicieux d'un précurseur de l'UDP-hexosamine radiomarqué, cette méthode de bioanalyse peut être utilisée pour quantifier les produits de divers éléments de cette famille de transférases, ainsi que des enzymes qui catalysent la modification ultérieure de ces produits de transférases. L'utilisation de cette méthode de bioanalyse flexible permet ainsi d'effectuer une analyse biochimique et enzymologique de nombreuses transférases membranaires.
Anderson Matt S.
Hyland Sheryl A.
Merck & Co. Inc.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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