Method for end pointing enzyme detection methods

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/44 (2006.01) C12Q 1/54 (2006.01)

Patent

CA 2198951

The present invention involves a composition and method for the determination of enzymatic activity or enzyme substrate concentration in a fluid test sample in which the enzyme catalyzes a reaction in a reagent system to provide a detectable response indicative of the concentration of the enzyme or enzyme substrate in the test sample. A measured amount of a protease capable of eliminating the enzymatic activity is included in the reagent composition, so that when a measured amount of test sample is treated, the reaction producing the detectable response will have a definite end point. The invention is particularly useful in conjunction with the determination of leucocytes in urine wherein the leukocytes are lysed to release their human leucocyte elastase which hydrolyzes a chromogenic ester to provide a phenol which then reacts with a diazonium salt to form a colored azo dye.

La présente invention concerne une composition et une méthode pour la détermination de l'activité enzymatique ou de la concentration du substrat de l'enzyme dans un échantillon de liquide à analyser; dans cette méthode, l'enzyme catalyse une réaction dans un système de réactifs pour donner une réponse détectable indicative de la concentration de l'enzyme ou du substrat de l'enzyme dans l'échantillon à analyser. Une quantité mesurée d'une protéase capable d'éliminer l'activité enzymatique est comprise dans la composition de réactifs, de manière que lorsqu'une quantité mesurée de l'échantillon à analyser est traitée, la réaction produisant la réponse détectable aura un point final de réaction bien défini. L'invention est particulièrement utile en conjonction avec la détermination des leucocytes dans l'urine dans laquelle les leucocytes sont lysés pour libérer leur élastase leucocytaire humaine qui hydrolyse un ester chromogène pour donner un phénol qui réagit ensuite avec un sel de diazonium pour former un colorant azoïque coloré.

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