Non-stochastic generation of genetic vaccines and enzymes

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/10 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01) A61K 39/39 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C07K 14/445 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)

Patent

CA 2325351

This invention provides methods of obtaining novel polynucleotides and encoded polypeptides by use of non-stochastic methods of directed evolution (DirectEvolution.TM.). These methods include non- stochastic polynucleotide site-saturation mutagenesis (Gene Site Saturation Mutagenesis.TM.) and non-stochastic polynucleotide reassembly (GeneReassembly.TM.). Through use of the claimed methods, genetic vaccines, enzymes, and other desirable molecules can be evolved towards desirable properties. For example, vaccine vectors can be obtained that exhibit increased efficacy for use as genetic vaccines. Vectors obtained by using the methods can have, for example, enhanced antigen expression increased uptake into a cell, increased stability in a cell, ability to tailor an immune response, and the like. This invention provides methods of obtaining novel enzymes that have optimized physical and/or biological properties. Furthermore, this invention provides methods of obtaining a variety of novel biologically active molecules, in the fields of antibiotics, pharmacotherapeutics, and transgenic traits.

La présente invention concerne des procédés de préparation de nouveaux polynucléotides et de polypeptides codés par des procédés non stochastiques d'évolution dirigée (DirectEvolution<3>). Ces procédés impliquent la mutagenèse à saturation de site polynucléotidique non stochastique (Gene Site Saturation Mutagenesis<3>) et le réassemblage polynucléotidique non stochastique (GeneReassembly<3>). Grâce à ces procédés revendiqués, on peut faire évoluer des vaccins génétiques, des enzymes, et d'autres molécules souhaitées vers des propriétés voulues. On peut par exemple obtenir des vecteurs de vaccins à efficacité accrue et les utiliser comme vaccins génétiques. Les vecteurs obtenus avec ces procédés peuvent présenter, par exemple, une expression antigénique accrue, une assimilation accrue dans la cellule, une stabilité accrue dans la cellule, une capacité à adapter la réponse immunitaire, et analogue. Par ailleurs, cette invention concerne des procédés de préparation de nouvelles enzymes présentant des propriétés physiques et/ou biologiques optimisées. De plus, cette invention concerne des procédés de préparation de nouvelles molécules variées biologiquement actives dans le domaine des antibiotiques, des pharmacothérapeutiques, et des caractères transgéniques.

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