Virus purification using ultrafiltration

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 7/02 (2006.01)

Patent

CA 2602944

The invention provides a method for the purification, of a virus comprising a step of ultrafiltration wherein the reteniate contains the virus, wherein back pressure of at least 5 kPa is applied on the permeate side. Th ivention also provides a method for purification of a recombinant adenovirus, said m ethod consisting essentially of: a) culturing cells that are infected with said recombinant adenovirus, b) lysing said cells and removing free nucleic acid, to provide a lysate comprising the recombinant adenovirus, c) clarifying the lysate to obtain an adenovirus preparation, d) subject the adenovirus preparation to ultrafiltration, wherein the adenovirus preparation is in the retentate, to concentrate the adenovirus preparation, e) subjecting the adenovirus preparation of step d) to ultrafiltration, wherein the adenovirus preparation is in the retenate and exchanging it with at least 5 diafiltration volumes (DFVs) of buffer, wherein in steps d) and e) back pressure of at least 5 kPa is applied on the permeate side.

L'invention concerne une méthode pour purifier un virus. Cette méthode comprend une étape d'ultrafiltration dans laquelle le rétentat contient le virus et dans laquelle une contrepression d'au moins 5 kPa est appliquée du côté du perméat. L'invention concerne également une méthode pour purifier un adénovirus recombinant. Cette méthode consiste essentiellement à: a) cultiver des cellules infectées par cet adénovirus recombinant, b) lyser ces cellules et supprimer l'acide nucléique libre pour obtenir un lysat comprenant l'adénovirus recombinant, c) clarifier le lysat pour obtenir une préparation d'adénovirus, d) soumettre la préparation d'adénovirus à une ultrafiltration, la préparation d'adénovirus se trouvant dans le rétentat pour concentrer la préparation d'adénovirus, e) soumettre la préparation d'adénovirus de l'étape d) à une ultrafiltration, la préparation d'adénovirus se trouvant dans le rétentat et échanger celle-ci avec au moins 5 volumes de diafiltration (DFS) de tampon, dans les étapes d) et e), une contrepression d'au moins 5 kPa étant appliquée du côté du perméat.

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