C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/01 (2006.01)
Patent
CA 2621466
Compositions and methods to utilize coat proteins of tobacco mosaic virus (TMV) as a scaffold with commonly available linker chemistries and surface antigens to enhance immune responses when used as a vaccination; randomized library to introduce a reactive lysine or cysteine residue externally located at the amino-terminus of the coat protein. TMV coat protein modification allows a controlled stoichiometric biotinylation of the Introduced lysine or cysteine residues further allowing the attachment of antigens using streptavidin as a linker to the biotinylated coat protein. A TMV-protein complex vaccine prepared utilizing this invention results in enhanced immunogenicity and a detectable humoral immune response after only a single immunization in mice.
La disposition de peptides ou protéines dans un arrangement répétitif ordonné tel que sur la surface d'une particule de type virus, est connue pour induire une réponse immunitaire améliorée par rapport aux vaccins avec un antigène protéine "libre". Les protéines de coque 2100 contenant la capside en forme de bâtonnet du virus de la mosaïque du tabac (TMV) peuvent abriter de courtes insertions peptidiques dans la séquence primaire, mais la disposition de plus grandes fractions protéiques sur la surface du virion par fusions génétiques à la protéine de capside a été impossible. Puisque le MV manque de résidus exposés à la surface compatibles avec des compositions chimiques de liaison facilement disponibles, nous utilisons une approche de banque aléatoire pour introduire une lysine réactive à l'extrémité amino-terminale externe de la protéine de coque. Il s'est avéré que nous pouvions facilement contrôler l'extension de la conjugaison du virion et la biotinylation stoechiométrique de la lyse introduite. Pour caractériser cette plate-forme modulaire pour la disposition des protéines hétérologues, nous avons lié un antigène modèle (streptavidine (S A)-protéine fluorescente verte (GFP), exprimé et purifié de plantes) à la surface du TMV, créant ainsi une particule de virus décorée GFP-SA. Une détermination rapide et quantitative du niveau de décoration de la capside du TMV a été effectuée en soumettant le complexe à une analyse des acides aminés et en résolvant la famille d'équations linéaires en ce qui concerne les moles p de chaque résidu à la composition d'acides aminés connue des composantes du complexe. Nous avons obtenu une charge tétramère GFP-SA de 26 % correspondant à la présentation d'environ 2200 GFP fractions par virion intact. Nous avons évalué l'immunogénicité de virions décorés GFP à la fois chez les souris et cochons d'Inde, et avons trouvé des titres IgG humoraux accrus dans les deux espèces, par rapport à des tétramères GFP-SA non liés. Chez la souris, nous avons observé une réponse humorale décelable après une seule immunisation par le complexe protéique TMV. En démontrant la présence de protéines entières, cette étude élargit l'utilité du TMV comme support de vaccin au-delà de ce que permet la manipulation génétique.
Lindbo John A.
Palmer Kenneth E.
Smith Mark L.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Kentucky Bioprocessing Llc
LandOfFree
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