Methods of reversibly binding a biotin compound to a support

Details Methods of reversibly binding a biotin compound to a support Methods of reversibly binding a biotin compound to a support

G - Physics

01

N

G01N 33/53 (2006.01) C12N 1/00 (2006.01) C12N 5/00 (2006.01) C07K 14/36 (2006.01)

Patent

CA 2671326

Methods of reversal of the binding between a biotin compound and a biotin- binding compound are disclosed. A method of reversibly releasing a biotinylated moiety from a streptavidin (or avidin) coated support is shown as an example. The strong interaction between streptavidin or avidin-biotin is made much weaker by using a combination of modified streptavidin or avidin and modified biotin like desthiobiotin or a derivative thereof like DSB-X Biotin. A protein, such as an antibody may be biotinylated with the modified biotin. When this protein is isolated by binding the modified biotin to the modified streptavidin or avidin bound to an solid surface, it may be released under very gently and very rapid conditions by addition of free biotin. In contrast to proteins obtained by the prior art release methods the protein obtained using the previously available release methods, the proteins obtained using the methods disclosed herein will maintain their native conformation. Uses of the methods in various procedures including cell detachment procedures and techniques of detection, identification, determination, purification, separation and/or isolation of target proteins or nucleic acid molecules are also described.

L'invention concerne des procédés d'inversion de la liaison entre un composé biotine et un composé de liaison à la biotine. Un procédé de libération réversible d'une fraction biotinylée à partir d'un support revêtu de streptavidine (ou d'avidine) est présenté comme exemple. L'interaction forte entre la streptavidine ou l'avidine-biotine est rendue bien plus faible par l'utilisation d'une combinaison de streptavidine ou d'avidine modifiée et de biotine modifiée comme la desthiobiotine ou un dérivé de celle-ci comme la biotine DSB-X. Une protéine, telle qu'un anticorps, peut être biotinylée par la biotine modifiée. Lorsque cette protéine est isolée par liaison de la biotine modifiée à la streptavidine ou avidine modifiée liée à une surface solide, elle peut être libérée dans des conditions très douces et très rapides par l'addition de biotine libre. A l'inverse des protéines obtenues par les procédés de libération de l'état antérieur de la technique, la protéine obtenue à l'aide des procédés de libération précédemment disponibles, les protéines obtenues à l'aide des procédés décrits ici conserveront leur conformation native. L'invention concerne également des utilisations des procédés dans divers modes opératoires comprenant des modes opératoires de détachement de cellules et techniques de détection, d'identification, de détermination, de purification, de séparation et/ou d'isolement de protéines cibles ou molécules d'acide nucléique cibles.

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