Nucleic acid sequencing

Details Nucleic acid sequencing Nucleic acid sequencing

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2277520

Provided is a method for sequencing DNA, which compasses (a) obtaining a target DNA population comprising one or more single stranded DNAs to be sequenced, each of which is present in a unique amount and bears a primer to provide a double-stranded portion of the DNA for ligation thereto; (b) contacting the DNA population wash an array of hybridisation probes, each probe comprising a label cleavably attached to a known base sequence of predetermined length, the array containing all possible bast sequences of that predetermined length; (c) removing all unligated probes; followed by the steps of: (d) cleaving the ligated probes to release each label; (e) recording the quantity of each label; and (f) activating the extended double-stranded portion to enable ligation thereto; wherein (g) steps (b) to (f) are repeated in a cycle for a sufficient number of times to determine the sequence of the or each single-stranded DNA by determining the sequence of release of each label.

La présente invention concerne un procédé de séquençage de l'ADN consistant à: (a) constituer une population d'ADN cible comprenant un ou plusieurs ADN simple brin à séquencer, chacun d'eux étant présent en une quantité unique et chacun d'eux portant une amorce afin d'obtenir une partie d'ADN double brin pour la ligation; (b) à mettre en contact la population d'ADN avec un réseau de sondes d'hybridation, chaque sonde comprenant un marqueur attaché de façon clivable à une séquence nucléotidique connue d'une longueur prédéterminée, le réseau comprenant toutes les séquences nucléotidiques possibles de cette longueur prédéterminée; (c) à enlever toutes les sondes non ligaturées; et ensuite (d) à couper les sondes ligaturées afin de libérer chaque marqueur; (e) à enregistrer la quantité de chaque marqueur; (f) et à activer la partie double brin étendue afin de permettre la ligation sur celle-ci; (g) à répéter les étapes (b) à (f) en ordre successif un nombre de fois suffisant pour permettre le déchiffrement de la séquence de l'ADN ou de chaque ADN simple brin par détermination de la séquence de libération de chaque marqueur.

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