C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/15 (2006.01) A61K 39/21 (2006.01) C07K 1/36 (2006.01) C07K 14/16 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01)
Patent
CA 2077753
A method for purifying recombinant HIV gp120 so as to provide a glycopeptide having protein/protein binding properties substantially identical to natural viral HIV gp120, which comprises fractionating a composition containing crude gp120 sequentially using (1) ion exchange chromatography, (2) hydrophobic-interaction chromatography, and (3) size exclusion filtration, collecting at each step a fraction that exhibits specific binding affinity for CD4 peptide. The process is carried out in the absence of any affinity purification steps or any steps (such as reverse-phase HPLC) that use contact protein with organic solvents. The product obtained by this method is a purified, full-length, non-fusion recombinant HIV gp120 glycoprotein having protein/ protein-interaction properties substantially identical to gp120 as presented on an HIV virus, including binding affinity for CD4 and binding affinity for at least one antibody capable of neutralizing HIV infectivity.
Une méthode de purification de gp120 d'HIV recombinant destinée à fournir un glycopeptide présentant des propriétés de liaison protéine/protéine pratiquement identiques à la protéine gp 120 virale naturelle d'HIV, qui consiste à fractionner une composition contenant la gp120 brute en utilisant de manière séquentielle (1) la chromatographie à échange d'ions, (2) la chromatographie à interaction hydrophobe, et (3) la filtration à exclusion de grandeur, et en prélevant à chaque étape une fraction présentant une affinité liante spécifique pour le peptide CD4. Cette procédure est effectuée en l'absence de toute étape de purification d'affinité ou d'étapes (telles que la chromatographie liquide à haute pression à phase inversée) qui utilisent des protéines de contact avec des solvants organiques. Le produit obtenu selon cette méthode est une glycoprotéine gp120 de HIV recombinant, non-fusionnable, purifiée et dans sa longueur totale, présentant des propriétés d'interaction protéine/protéine pratiquement identiques au gp120 présentée sur un virus HIV, et comprenant une affinité liante au CD4 et une affinité liante pour au moins un anticorps capable de neutraliser l'infectivité de HIV.
Haigwood Nancy L.
Scandella Carl
Borden Ladner Gervais Llp
Novartis Vaccines And Diagnostics Inc.
LandOfFree
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