G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 21/00 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01)
Patent
CA 2648777
The invention relates to analysis of object dyed with fluorescent colouring agents carried out with the aid of a fluorescent microscope. The microscope comprises an optical system for visualising and projecting a sample image to a video camera, a computer for recording and processing images, a sample holder arranged in front of an object lens and a fluorescent radiation exciting source. The separately fluorescent visible molecules and nanoparticles are periodically formed in different object part. A laser produces the oscillation thereof which is sufficient for recording the non-overlapping images of said molecules and nanoparticles and for decolouring already recorded fluorescent molecules. The pictures of recorded individual molecule and nanoparticle images are processed by a computer for searching the co-ordinates of the stain centres and building the object image according to the calculated co-ordinates of the stain centres corresponding to the co-ordinates of the individual fluorescent molecules and nanoparticles. Said invention makes it possible to obtain a two- and three-dimensional image with a resoling power better than 20 nm and to record a colour image by dyeing proteins, nucleic acids and lipids with different colouring agents.
Le procédé se rapporte à l'analyse d'objets qui sont peints avec des colorants fluorescents, ladite analyse s'effectuant au moyen d'un microscope à fluorescence amélioré qui, grâce à sa résolution améliorée, est parfois appelé "nanoscope". L'invention proposé un procédé pour obtenir une image au moyen d'un microscope qui contient: un système optique d'observation visuelle et de projection de l'image d'un échantillon dans une caméscope capable d'enregistrer et de numériser avec un faible niveau de bruit les images de molécules et de nanoparticules fluorescentes isolées, un ordinateur destiné à l'enregistrement et au traitement d'images, un support d'échantillons, disposé en face de l'objectif, une source d'excitation de rayonnement fluorescent, un ensemble de filtres bloquants interchangeables destinés à créer une lumière fluorescente de l'échantillon, qui se distingue en ce que dans de différentes zones de l'objet on crée périodiquement des molécules et des nanoparticules fluorescentes visibles isolément. Le laser assurer leur excitation qui est suffisante non seulement pour l'enregistrement de leurs images non superposées mais aussi pour la décoloration des molécules fluorescentes non encore enregistrées. Des dizaines de milliers de poses comprenant les images enregistrées de molécules et de nanoparticules isolées (ayant la forme de taches possédant un diamètre de l'ordre de la longueur d'onde de la lumière fluorescente multipliée par l'agrandissement du microscope) sont traitées sur un ordinateur à des fins de détermination des coordonnées du centre des taches et de construction d'une image de l'objet sur la base des millions de coordonnées calculées de centres des taches qui correspondent aux coordonnées des molécules et des nanoparticules fluorescentes individuelles. L'invention permet d'obtenir des images en deux et trois dimensions avec une résolution supérieure à 20 nm (à comparer avec la formule I), d'enregistrer des images couleur en cas de coloration avec des colorants différents des protéines, des acides nucléiques, des lipides, etc.
Klimov Andrey Alexeevich
Klimov Dmitry Andreevich
Klimov Evgeniy Andreevich
Klimova Tatiana Vitalyevna
Klimov Andrey Alexeevich
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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