C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/84 (2006.01) A01H 1/00 (2006.01) A01H 4/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2155570
The invention provides a method for transforming a plant through a bacterium belonging to genus Agrobacterium, comprising transforming plant cells simultaneously with a first T-DNA (1) and a second T-DNA (2); and selecting the cells which acquired drug resistance; the first T-DNA (1) containing a gene giving the drug resistance, which functions in the plant; the second T-DNA (2) containing a desired DNA fragment to be introduced into the plant, the second T-DNA (2) being contained in a hybrid vector; the hybrid vector being prepared by homologous recombination between an acceptor vector and an intermediate vector in the bacterium belonging to genus Agrobacterium; the acceptor vector containing at least (a) a DNA region having a function to replicate a plasmid in the bacterium belonging to genus Agrobacterium and Escherichia co1i, (b) a DNA region containing virB gene and virG gene in virulence region of Ti plasmid pTiBo542 of Agrobacterium tumefaciens, and (c) a DNA region which is homologous with a part of the intermediate vector, which is subjected to homologous recombination in the bacterium belonging to genus Agrobacterium; the intermediate vector containing at least (i) a DNA region having a function to replicate a plasmid in Escherichia coli, which does not function in the bacterium belonging to genus Agrobacterium, (ii) a DNA region which is homologous with a part of the acceptor vector, which is subjected to homologous recombination in the bacterium belonging to genus Agrobacterium, and (iii) a DNA region which constitutes at least a part of the second T-DNA.
On décrit un procédé de transformation de plantes qui permet de préparer à haut rendement, une plante transgénique régénérée contenant des gènes souhaités qui y ont été introduits, ce qui permet de préparer, dans la génération suivante, des plantes transgéniques contenant ces gènes souhaités mais pas les gènes de résistance à un produit qui ont servi de marqueur de sélection. Ce procédé consiste à transformer une plante avec des agrobactéries et se caractérise par la co-transformation de cellules végétales avec un premier ADN-T(1), qui fonctionne dans les plantes et contient des gènes de résistance à un produit, et un deuxième ADN-T(2), placé dans le vecteur hybride décrit ci-après et contenant des fragments insérés de l'ADN souhaité qu'on veut introduire dans la plante. Ce vecteur hybride s'obtient par recombinaison homologue, dans l'agrobactérie entre le vecteur accepteur et le vecteur intermédiaire décrits ci-dessous. Le vecteur accepteur contient au moins (a) une région d'ADN dotée de la fonction de réplication de plasmides qui est efficace chez les agrobactéries et les colibacilles, (b) une région d'ADN contenant les gènes vir B et vir G de la région virulente du plasmide Ti pTiBo542 d'<u>Agrobacterium tumefaciens</u>, et (c) une région d'ADN qui est homologue d'une partie du vecteur intermédiaire décrit ci-après et capable de recombinaison homologue par l'intermédiaire de cette partie de l'agrobactérie. Le vecteur intermédiaire contient au moins: (i) une région d'ADN à fonction de réplication de plasmides qui est efficace chez les colibacilles mais pas chez les agrobactéries, (ii) une région d'ADN qui est homologue d'une partie du vecteur accepteur décrit ci-dessus et capable de recombinaison homologue par l'intermédiaire de cette partie de l'agrobactérie, et (iii) une région d'ADN qui constitue au moins une partie du deuxième ADN-T(2).
Hiei Yukoh
Komari Toshihiko
Saito Yasuhito
Japan Tobacco Inc.
Robic
LandOfFree
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