C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/06 (2006.01) C07K 14/365 (2006.01) C07K 14/58 (2006.01) C07K 14/635 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01)
Patent
CA 2237296
The invention relates to a process for recombinant preparation of peptides by expression of a DNA in micro-organisms, which DNA codes for a fusion protein made of streptavidin and one of the said peptides. Streptavidin and the peptide are bound by a peptide sequence which can be cleaved by an endoproteinase. The process also includes isolation of the insoluble, inactive protein, solublisation of the inactive protein using a denaturant, dilution of the denaturant at a pH value of between 8.5 and 11 until cleaving of the fusion protein by an endoproteinase can take place, cleaving of the fusion protein, lowering of the pH value until streptavin and non-cleaved fusion protein precipitate, and cleaning of the desired peptide from the supernatant. Said process is particularly suitably for producing parathromone and urodilatin and fragments thereof.
L'invention concerne un procédé de préparation par recombinaison de peptides par expression d'un ADN dans des micro-organismes, qui code une protéine de fusion issue de la streptavidine et d'un desdits peptides. La streptavidine et le peptide sont liés par une séquence peptidique pouvant être clivée par une endoprotéase. Ce procédé comprend également l'isolation de la protéine inactive non soluble, la solubilisation de la protéine inactive avec un dénaturant, la dilution du dénaturant à un pH compris entre 8,5 et 11, jusqu'à ce que le clivage de la protéine de fusion par une endoprotéinase puisse s'effectuer, le clivage de la protéine de fusion, abaissement du pH, jusqu'à ce que la strepavidine et la protéine de fusion clivée forment un précipité, et la purification du peptide voulu à partir du surnageant. Ce procédé s'utilise notamment pour préparer de la parathormone et de l'urodilatine, ainsi que des fragments de celles-ci.
Boehringer Mannheim Gmbh
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
Roche Diagnostics Gmbh
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1886015