Chemiluminescent detection methods using dual enzyme-labeled...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/28 (2006.01) C12Q 1/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 21/76 (2006.01) G01N 33/535 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)

Patent

CA 2259963

Methods of detecting analytes or target species using two enzyme-labeled specific binding partners where the two enzymes function in concert to produce a detectable chemiluminescent signal are disclosed. The methods use a specific binding partner labeled with a hydrolytic enzyme to produce a phenolic enhancer in close proximity to a peroxidase-labeled second specific binding partner. The method is useful to detect and quantitate with improved specificity various biological molecules including antigens and antibodies by the technique of immunoassay, proteins by Western blotting, DNA by Southern blotting, RNA by Northern blotting. The method may also be used to detect DNA mutations and juxtaposed gene segments in chromosomal translocations and particularly to unambiguously identify heterozygous genotypes in a single test.

Cette invention se rapporte à des procédés pour détecter des analytes ou des espèces cibles au moyen de deux partenaires de liaison spécifique à marquage enzymatique, dans lesquels les deux enzymes fonctionnent en association pour produire un signal chimioluminescent détectable. Ces procédés utilisent un partenaire de liaison spécifique marqué avec une enzyme hydrolytique, afin de produire un activateur phénolique à proximité étroite d'un second partenaire de liaison spécifique marqué par peroxidase. Ce procédé est utile pour détecter et quantifier avec une spécificité accrue diverses molécules biologiques, y compris des antigènes et des anticorps, par la technique de l'immunodosage, des protéines par analyse Western blot, et des ADN par analyse Southern blot, et des ARN par l'analyse Northern blot. Ce procédé peut également servir à détecter les mutations d'ADN et les segments de gènes juxtaposés dans des translocations chromosomiques et plus particulièrement à identifier sans ambiguïté les génotypes d'hétérozygotes en un seul test.

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