C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 19/34 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/06 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2460639
Methods of amplifying nucleic acid have now been discovered which include the steps of: a) annealing a primer to a template nucleic acid sequence, the primer having a first portion which anneals to the template and a second portion of predetermined sequence; b) synthesizing a polynucleotide that anneals to and is complementary to the portion of the template between the location at which the first portion of the primer anneals to the template and the end of the template, the polynucleotide having a first end and a second end, wherein the first end incorporates the primer; c) separating the polynucleotide synthesized in step (b ) from the template; d) annealing a nested oligonucleotide to the second end of the polynucleotide synthesized in step (b), the nested oligonucleotide having a first portion that anneals to the second end of the polynucleotide and a second portion having the same predetermined sequence as the second portion of the primer; e) extending the polynucleotide synthesized in step (b) to provide a terminal portion thereof that is complementary to the predetermined sequence; and f) amplifying the extended polynucleotide using a single primer having the predetermined sequence.
L'invention concerne des procédés d'amplification d'acides nucléiques comprenant les étapes suivantes : a) hybrider une amorce avec une séquence d'acide nucléique de matrice ladite amorce présentant une première partie qui s'hybride avec la matrice et une seconde partie d'une séquence prédéterminée ; b) synthétiser un polynucléotide qui s'hybride avec la partie de la matrice et en est complémentaire, entre l'endroit où la première partie de l'amorce s'hybride avec la matrice et l'extrémité de la matrice, le polynucléotide présentant une première extrémité et une seconde extrémité, la première extrémité incorporant l'amorce ; c) séparer le polynucléotide synthétisé dans l'étape (b) de la matrice ; d) hybrider un oligonucléotide niché avec la seconde extrémité du polynucléotide synthétisé dans l'étape (b), l'oligonucléotide niché présentant une première partie qui s'hybride avec la seconde extrémité du polynucléotide et une seconde partie présentant la même séquence prédéterminée que la seconde partie de l'amorce ; e) allonger le polynucléotide synthétisé dans l'étape (b) pour former une partie terminale qui est complémentaire à la séquence prédéterminée ; et f) amplifier le polynucléotide allongé au moyen d'une seule amorce contenant la séquence prédéterminée.
Bowdish Katherine S.
Frederickson Shana
Lin Ying-Chi
Maruyama Toshiaki
Renshaw Mark
Alexion Pharmaceuticals Inc.
Mcfadden Fincham
LandOfFree
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