C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01D 15/08 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01) G01N 21/55 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 30/02 (2006.01)
Patent
CA 2309760
Covalently bound non-polar tags are used to increase the retention times of double stranded polynucleotides on Matched Ion Polynucleotide Chromatography (MIPC) columns. In doing so, separations of DNA mixture components is improved. Additionally, when the non-polar tags are fluorophores, detection limits are also greatly reduced. Strategically tagged primers are used in conduction with PCR to produce DNA fragments having specifically tagged strands. This improves mutation detection by MIPC in several ways. Separations are improved, detection sensitivity is enhanced, and non-stoichiometric addition of wild type DNA prior to hybridization is now possible since only tagged fragments will be observed with a fluorescence detector. Non-polar tags are also used as a novel alternative to G-C clamping during MIPC under partially denaturing conditions. Reversible DNA bonding dyes, such as DNA intercalator dyes and DNA groove binding dyes, are used to reduce the detection limit of polynucleotides separated by MIPC.
On utilise des marqueurs non polaires liés par covalence pour augmenter les temps de rétention de polynucléotides double brin dans des colonnes de chromatographie de polynucléotides à ions appariés (MIPC). Ce faisant, on améliore les séparations de constituants du mélange d'ADN. En outre, lorsque les marqueurs non polaires sont des fluorophores, on réduit aussi considérablement les seuils de détection. On utilise des amorces marquées stratégiquement, pour procéder à une ACP, afin de produire des fragments d'ADN possédant des brins marqués spécifiquement. Ceci permet d'améliorer la détection de mutations par MIPC de plusieurs façons. Les séparations sont améliorées et la sensibilité de détection est augmentée. En outre, il est dorénavant possible d'effectuer une addition non stoechiométrique d'ADN de type sauvage avant l'hybridation, étant donné que seuls les fragments marqués seront observés à l'aide d'un détecteur de fluorescence. On utilise également des marqueurs non polaires en tant que nouvelle possibilité de fixation G-C durant la MIPC dans des conditions partiellement dénaturantes. On utilise des colorants liant l'ADN réversibles, tels que des colorants d'intercalation d'ADN et des colorants liant le sillon d'ADN, pour réduire le seuil de détection de polynucléotides séparés par MIPC.
Gjerde Douglas T.
Haefele Robert M.
Taylor Paul D.
Dennison Associates
Transgenomic Inc.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1930113