C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) A01H 1/00 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)
Patent
CA 2269752
The present invention relates to the isolation of genes encoding polyphenol oxidase (PPO) from plants. In a first aspect of the present invention there is provided a method for preparing nucleic acid encoding PPO, fragments and derivatives thereof, which method includes providing a sample of plant tissue, a first primer in sense orientation having a sequence corresponding to a conserved region of a PPO gene, a second primer in antisense orientation having a sequence corresponding to a conserved region of a PPO gene; isolating genomic DNA from said plant tissue; and amplifying the genomic DNA using the first and second primers. Surprisingly, the applicant has found that PPO genes in plants lack introns and, therefore, fragments of PPO genes may be amplified directly from genomic DNA of a range of plants. The lack of introns means that the size of the fragments can be predicted and bands of the appropriate size can be selected for cloning.
La présente invention concerne l'isolement de gènes codant l'oxydase de polyphénol (OPP) provenant de plantes. Un premier aspect de la présente invention concerne un procédé de préparation d'acide nucléique codant l'OPP ainsi que des fragments et des dérivés de celle-ci. Ce procédé comprend l'apport d'un échantillon de tissu végétal, d'une première amorce d'orientation sens, qui a une séquence correspondant à une région conservée d'un gène d'OPP, d'une deuxième amorce d'orientation antisens, ayant une séquence correspondant à une région conservée d'un gène d'OPP; le procédé comprend encore l'isolement d'ADN génomique provenant du tissu végétal mentionné, et l'amplification de l'ADN génomique par l'utilisation de la première et de la deuxième amorce. De manière surprenante, le déposant a découvert que les gènes d'OPP, dans les plantes, sont dépourvus d'introns et que, par conséquent, des fragments de gènes d'OPP peuvent être amplifiés directement à partir d'ADN génomique d'une série de végétaux. L'absence d'introns signifie qu'on peut prédire la taille des fragments et choisir des bandes de la taille appropriée pour le clonage.
Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1952320